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Laboratorio de Análisis Clínicos
T.L.C. Andrés Valle Gutiérrez
Hemograma Automatizado
introducción
«La Sangre es un fluido muy especial»
J.W. Goethe en su obra Fausto
Introducción
 Desorden hematológico
 Dx de primera instancia es la citometría hemática
 Prueba mas rutinaria
 Se buscan maneras mas rápidas, fáciles y sencillas de
llevarla acabo.
 Por ello así hemos evolucionado desde las antiguas
cámaras de Neubauer y los tediosos conteos manuales,
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y citometria de flujo.
El estudio del paciente hematológico
Alteraciones en
elementos formes
Alteraciones a nivel
plasmático
 Citometría Hemática
 Frotis de sangre
periférica
 Reticulocitos
 VSG
 Tiempos de
coagulación
 Factores del
complemento
 Determinación de
anticuerpos
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ALGO DE HISTORIA
Siglo XIX,
Primeros
Conteos
manuales
1952 Los
Coulter
inventan
el Coulter
Counter
A
53, Parker y
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el principio
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Dispersión
Óptica,
tiñendo a
los G.r. y a
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rojo y azul.
1960
Inicia
la
CMF
Actualidad, modernos
equipos
automatizados,
algunos de CMF
realizan
INMUNOTIPIFICACIO
N
Los hermanos coulter
Coulter Counter Model A
Realizaba los conteos sanguíneos sin diferencial, en 10
minutos pero no daba diferencial, por lo que los mejoro para
crear toda la serie Coulter Counter Model .
Beckman coulter LH 750
BHC
Clasificación de
Hemacitometros
1 GENERACION:
BH Manual de 5
parámetros
2 GENERACION:
BH
semiautomatizada
21 parámetros
3 GENERACION:
BH Automatizada
de 18 parámetros
con 3 histogramas
4 GENERACION:
BH Automatizada
de 18 parámetros
mas 3
histogramas y
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5 GENERACION:
BHC, 28
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CD8, Plaquetas,
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Reticulada
Principio de coulter
Principios de los contadores
automatizados
Los equipos automatizados para recuentos celulares
han sido elaborados teniendo en cuenta algunas
propiedades de las células:
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 Son malas
conductoras de la
electricidad, por lo
que aumentan la
Resistencia Eléctrica.
 Tienen variedad de
tamaños.
 Tienen una densidad
caracterizarle y
diferente para cada
una.
 Cada una refracta la luz
con una intensidad
diferente.
 Tienen composición
citoquímica diferente.
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citoplasma es diferente
para cada célula.
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Si el orificio es atravesado solamente por líquido diluyente, la resistencia
eléctrica medida por los electrodos es mínima y constante, pero cuando el
orificio es atravesado por una célula sanguínea, se produce un aumento de la
resistencia eléctrica y un cambio de potencial entre los electrodos.
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ventajas
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75 a 85% de fiabilidad 95 A 98% de fiabilidad, repite la prueba 3
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Histograma
Son gráficas de frecuencias de
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Eje X representa el volumen
celular en fL.
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un equivalente numérico real.
Histogramas eritrocitarios
La curva normal de glóbulos rojos es cónica, modal y se encuentra
representada en Tamaños de 60 a 110 FL, con un pico o curva
secundaria modal de plana a ligeramente cóncava con muy poca
altura que llega a 200 FL.
HISTOGRAMA DE ERITROCITOS
RBC
REL
NIo
DISTRIBUCIÓN NORMAL
RBC 6.09
HGB 17.5
HCT 50.6
MCV 83.1
MCH 28.7
MCHC 34.6
RDW 13.0
10050 200 300
130
DEDO
CUERPO
Artefactos
glóbulos rojos
aglutinados
VCM x ADE
fL
Desviaciones
 Curva desplazada a la izquierda
 Células con un registro menor a 60 fL
 Se observa en microcitosis, poiquilocìtosis,
esquistocitos, leptocitos, dacriocitos,
drepanocitos.
 Curva desplazada a la derecha
 Células con mas de 95 fL
 Se observa en macrocitosis, ovalocitos,
eliptocitos, normoblastos y parásitos hemáticos
Micro y Macro
CURVA BIMODAL
Se presenta cuando existen dos poblaciones celulares, cada
una hace su media y se interceptan en las coincidencias de
tamaños.
ADE AUMENTADO
Se observan en diferentes casos de anisocitosis e implican un
registro de pulsos con una dispersión en tamaños muy grandes,
en algunos casos incluyendo pulsos menores de 30 fL que no
quedan registrados en el histograma de rojos sino en el de
Arranque extenso en Y
 El recuento de plaquetas y de glóbulos rojos se
realiza en la misma dilución y que luego los pulsos
registrados son discriminados únicamente por
tamaño, dejando para el histograma y recuento de
rojos los pulsos de tamaño superior a 30 FL, y los de
tamaño inferior quedan registrados como plaquetas.
 Se presenta cuando hay microcitosis, o
esquistocitos, drepanocitos y leptocitos, son
contados como plaquetas aumentando su recuento
y disminuyendo el de rojos.
Arranque extenso en Y
Se presenta en trombocitosis o
macrotrombocitosis o hay presencia de
Reticulocitos
El equipo los tiñe supra vitalmente y así creando un precipitado
de azul nuevo de metileno y la maquina lo detecta por medio
de sus detectores ópticos.
Histogramas plaquetarios
Es una curva cónica sin distribución normal cuya distribución
en tamaños está de
2 a 20 FL.
HISTOGRAMA DE PLAQUETAS
DISTRIBUCIÓN NORMAL
NOMOGRAMA NORMAL
PLT 319
PCT .239
MPV 7.5
PDW 16.3
REL
NIo:
PLT FEMTOLITROS2 10 20
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Trombocitopenia
Extendida 25-30 FL
Arranque extenso en leucocitos
PLAQUETAS EN TOPE
Trombocitosis
HISTOGRAMA LEUCOCITARIO
Los glóbulos blancos se agrupan en tres curvas claramente definidas y estas configuran
la arquitectura normal.
• Curva de linfocitos cóncava 50-100 fL
• Curva de mononucleares plana a cóncava 100- 150 fL.
• Curva de granulocitos cóncava 150-380 fl
HISTOGRAMA DE LEUCOCITOS
Recuento total de Leucocitos
90 160
Linfocitos
MO – MID = Eosinófilo, Basófilo, Monocito
MO o MID
Granulocitos
Neutrófilos
EJEMPLO DE ANALISIS
DISTRIBUCIÓN NORMAL
WBC 8.3
LY # 2.5
MO # .8
GR # 5.1
50 100 300200 400WBC
REL
NIo.
Agranulocitos
LINFOCITOPENIA
Linfocitopenia y Granulocitosis
INTERFERENCIA CELULAR
Conteo de precursores celulares, parásitos,
etc.
Nk linfocitosis
GRANULOCITOPENIA
UNION DE LA CURVA MONO CON LA GRANULOCITICA
Aumento cónico sin perdida de arquitectura
Leucocitosis, Linfocitos atipicos, monocitos activados.
Presencia de blastos
Granulocitos
GRANULO-MONOCITOSIS
UN AUMENTO EN ALGUNA DE ESTAS 2 LINEAS PUEDE
OCACIONAR LA UNION ENTRE AMBAS CURVAS.
Granulocitopenia
Neutrofilia
HAL REVISAR EL FSP :
Neutrofilia, aumento de BANDAS
HIpersegmentados
Neutrofilia-Monocitopenica
NEUTROFILIA ESPECIALMENTE BANDAS
Procesos malignos Medula osea
Alteración hemática completa
Bloques
Los bloques en la distribución del histograma se presenta cuando el número
de
células está disminuido (-1000) y se hace necesario aumentar los intervalos
leucocitosis
Valores sobrepasan a los que la maquina puede
contar
Entre 2000 – 100 000
INTRODUCCION A LOS
DISPERSOGRAMAS
dispersograma
Gráfico que representa la distribución de dos variables en una población de muestra.
Una variable se representa gráficamente en el eje vertical; la otra en el horizontal.
Un dispersograma demuestra el grado o tendencia de presentación de las variables en
relación mutua.
DISPERSOGRAMA
Cuadrante 1 Blastos
Cuadrante 2
Linfocitos
Cuadrante 3
Monocitos
Cuadrante 2
Linfocitos
Cuadrante 4
Neutrofilos
Cuadrante 6
Eosinófilos
Cuadrante 5
Cel. Dañadas
cuadrantes
 Cuadrante 1: Tenemos en este grupo núcleos de
normoblastos, agregados plaquetarios,
macroplaquetas, forma adultas de plasmodium,
sombras nucleares y células de difícil hemólisis como
drepanocitos.
 Cuadrante 2: Normalmente se ubican los linfocitos en
la región central derecha, la aparición de células en la
región superior e inferior derecha hacen sospechar
lapresencia de linfocitos atípicos. En la zona superior
central se sospecha la presencia de blastos.
 Cuadrante 3: Encontramos el registro de monocitos
hacia la región central derecha, la presencia de
células en la región central superior hace sospechar
la presencia de blastos.
cuadrantes
 Cuadrante 4: Se ubican en la zona central el registro normal de
neutrófilos; la aparición de células inmaduras de esta línea celular se
registra en la región superior de dicho cuadrante; la presencia de
neutrófilos de registro pequeños y los macropolicitos, se da en la
parte inferior del mismo cuadrante.
 Cuadrante 5: normalmente no presenta células, cuando allí por
alguna razón se encuentran células estas pueden relacionarse con
células dañadas de sangre envejecida.
 Cuadrante 6: En la región central de este cuadrante podemos
encintrar el registro deeosinòfilos, así mismo por la densidad de los
puntos registrados podemos sospechar el aumento de este tipo de
células
ANORMALIDADES
DISPERSOGRAMA ANORMAL
4
1. Blastos
2. Granulocitos
inmaduros
3. Neutrófilos
envejecidos
y lesionados
4. Plaquetas
gigantes
5. Eritrocitos
nucleados
6. Linfocitos
Variantes
7. Blastos
8. Linfocitos
Variantes
9. Blastos
5
9
2
7
8
3
6
1
NEUTROPENIA LINFOCITOSIS
V
O
L
U
M
E
N
WBC
DF1
GRANULOCITOS INMADUROS
V
O
L
U
M
E
N
DF1
WBC
LINFOCITOS ATÍPICOS
V
O
L
U
M
E
N
DF1
WBC
NEUTROPENIA LINFOCITOSIS
(ATÍPICOS)
V
O
L
U
M
E
N
DF1
WBC
EOSINOFILIA
V
O
L
U
M
E
N
DF1
WBC
GRANULOCITOS INMADUROS
V
O
L
U
M
E
N
DF1
WBC
¿Dudas?
Bibliografía
 Fundamentos de Hematología, Dr. Guillermo Ruiz Arguelles.
 Diagnóstico y Tratamiento Clínicos por el laboratorio, John
Bernard Henry.
 Hematología: La sangre y sus enfermedades, Dr. José Carlos
Jaime Pérez.
 Hemograma, Como hacer e interpretar, Dr. Raimundo Antonio
Gomes Oliveira.
 Hematología, Guía práctica para el diagnóstico microscópico, Dr.
Mathias Freund.
 Artículo de revisión, Semiología de la Citometría hemática,
Revista de la facultad de medicina UNAM, Dr. Rafael Hurtado
Monroy.

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1.5. Hemograma Automatizado

  • 1. Laboratorio de Análisis Clínicos T.L.C. Andrés Valle Gutiérrez Hemograma Automatizado
  • 2. introducción «La Sangre es un fluido muy especial» J.W. Goethe en su obra Fausto
  • 3. Introducción  Desorden hematológico  Dx de primera instancia es la citometría hemática  Prueba mas rutinaria  Se buscan maneras mas rápidas, fáciles y sencillas de llevarla acabo.  Por ello así hemos evolucionado desde las antiguas cámaras de Neubauer y los tediosos conteos manuales, hasta la modernidad de equipos de impedancia eléctrica y citometria de flujo.
  • 4. El estudio del paciente hematológico Alteraciones en elementos formes Alteraciones a nivel plasmático  Citometría Hemática  Frotis de sangre periférica  Reticulocitos  VSG  Tiempos de coagulación  Factores del complemento  Determinación de anticuerpos  COOMBS
  • 5.
  • 6.
  • 8. Siglo XIX, Primeros Conteos manuales 1952 Los Coulter inventan el Coulter Counter A 53, Parker y Host utilizan el principio de Dispersión Óptica, tiñendo a los G.r. y a los G.b de rojo y azul. 1960 Inicia la CMF Actualidad, modernos equipos automatizados, algunos de CMF realizan INMUNOTIPIFICACIO N
  • 10. Coulter Counter Model A Realizaba los conteos sanguíneos sin diferencial, en 10 minutos pero no daba diferencial, por lo que los mejoro para crear toda la serie Coulter Counter Model .
  • 12. BHC
  • 13. Clasificación de Hemacitometros 1 GENERACION: BH Manual de 5 parámetros 2 GENERACION: BH semiautomatizada 21 parámetros 3 GENERACION: BH Automatizada de 18 parámetros con 3 histogramas 4 GENERACION: BH Automatizada de 18 parámetros mas 3 histogramas y dispersograma 5 GENERACION: BHC, 28 parámetros, CD4- CD8, Plaquetas, Reticulocitos y Hb Reticulada
  • 14.
  • 16. Principios de los contadores automatizados Los equipos automatizados para recuentos celulares han sido elaborados teniendo en cuenta algunas propiedades de las células:
  • 17. Principios  Son malas conductoras de la electricidad, por lo que aumentan la Resistencia Eléctrica.  Tienen variedad de tamaños.  Tienen una densidad caracterizarle y diferente para cada una.  Cada una refracta la luz con una intensidad diferente.  Tienen composición citoquímica diferente.  La relación núcleo – citoplasma es diferente para cada célula.
  • 18. Principio de Coulter Si el orificio es atravesado solamente por líquido diluyente, la resistencia eléctrica medida por los electrodos es mínima y constante, pero cuando el orificio es atravesado por una célula sanguínea, se produce un aumento de la resistencia eléctrica y un cambio de potencial entre los electrodos.
  • 20. Lectura en el Osciloscopio
  • 22. DILUSION 1:300 G.B. +>30 fL 1: 15,000 G.R. +> 36fL PQT -<35 fL DILUSIONES
  • 23. ERRORES El error de coincidencia se presenta cuando la apertura coinciden dos células o más y son contadas como una sola; en este caso se disminuye el recuento total y se aumenta el volumen corpuscular de las células en la dilución.
  • 24.
  • 25. OXIDACION En el Hbnometro a 520 – 540nm Fe (++) Fe (+++) Férrico Ferroso Fe en Hb Ferrocianur o Rx LECTURA REACCION HB
  • 26. ADE Usada para diagnosticar anisocitosis en los eritrocitos, se observa en el histograma, Su V.R. es de 12 a 15%
  • 27. C,V,S
  • 28. Formula blanca  Al realizar esta medición en 5.000-10.000 leucocitos se determina el diferencial y si existe la presencia de células anómalas.
  • 29. DISPERSIÓN ÓPTICA Cada célula posee diferente volumen, morfología e índice de refracción Célula Láser Detector de ángulo amplio Detector de ángulo cerrado Angulo 0
  • 30.
  • 31.
  • 32. Cámara de Neubauer vs Analizador
  • 33. ventajas RECUENTOS MANUALES RECUENTOS AUTOMATIZADOS 75 a 85% de fiabilidad 95 A 98% de fiabilidad, repite la prueba 3 veces para comprobar Técnicas ya conocidas Rapidez Reactivo más barato Menos gasto de reactivo Frotis y evaluación citomorfológica sanguínea Histograma
  • 34. desventajas RECUENTO MANUAL RECUENTO AUTOMATIZADO Muy comunes los errores humanos Ciertos parámetros se calculan a partir del despeje matemático de fórmulas, lo que ocasiona que algunos datos sean errados Aproximadamente el proceso dura entre 45 minutos a 1 hora y media Diferencial poco confiable, tanto de plaquetas como de leucocitos, en su morfología Laborioso proceso Costos
  • 36. Histograma Son gráficas de frecuencias de volúmenes celulares. Eje X representa el volumen celular en fL. El eje Y; por ser relativo, no tiene un equivalente numérico real.
  • 37. Histogramas eritrocitarios La curva normal de glóbulos rojos es cónica, modal y se encuentra representada en Tamaños de 60 a 110 FL, con un pico o curva secundaria modal de plana a ligeramente cóncava con muy poca altura que llega a 200 FL.
  • 38. HISTOGRAMA DE ERITROCITOS RBC REL NIo DISTRIBUCIÓN NORMAL RBC 6.09 HGB 17.5 HCT 50.6 MCV 83.1 MCH 28.7 MCHC 34.6 RDW 13.0 10050 200 300 130 DEDO CUERPO Artefactos glóbulos rojos aglutinados VCM x ADE fL
  • 39. Desviaciones  Curva desplazada a la izquierda  Células con un registro menor a 60 fL  Se observa en microcitosis, poiquilocìtosis, esquistocitos, leptocitos, dacriocitos, drepanocitos.  Curva desplazada a la derecha  Células con mas de 95 fL  Se observa en macrocitosis, ovalocitos, eliptocitos, normoblastos y parásitos hemáticos
  • 41. CURVA BIMODAL Se presenta cuando existen dos poblaciones celulares, cada una hace su media y se interceptan en las coincidencias de tamaños.
  • 42. ADE AUMENTADO Se observan en diferentes casos de anisocitosis e implican un registro de pulsos con una dispersión en tamaños muy grandes, en algunos casos incluyendo pulsos menores de 30 fL que no quedan registrados en el histograma de rojos sino en el de
  • 43. Arranque extenso en Y  El recuento de plaquetas y de glóbulos rojos se realiza en la misma dilución y que luego los pulsos registrados son discriminados únicamente por tamaño, dejando para el histograma y recuento de rojos los pulsos de tamaño superior a 30 FL, y los de tamaño inferior quedan registrados como plaquetas.  Se presenta cuando hay microcitosis, o esquistocitos, drepanocitos y leptocitos, son contados como plaquetas aumentando su recuento y disminuyendo el de rojos.
  • 44. Arranque extenso en Y Se presenta en trombocitosis o macrotrombocitosis o hay presencia de
  • 45. Reticulocitos El equipo los tiñe supra vitalmente y así creando un precipitado de azul nuevo de metileno y la maquina lo detecta por medio de sus detectores ópticos.
  • 46. Histogramas plaquetarios Es una curva cónica sin distribución normal cuya distribución en tamaños está de 2 a 20 FL.
  • 47. HISTOGRAMA DE PLAQUETAS DISTRIBUCIÓN NORMAL NOMOGRAMA NORMAL PLT 319 PCT .239 MPV 7.5 PDW 16.3 REL NIo: PLT FEMTOLITROS2 10 20
  • 48. No hay arranque en x Trombocitopenia
  • 49. Extendida 25-30 FL Arranque extenso en leucocitos
  • 51. HISTOGRAMA LEUCOCITARIO Los glóbulos blancos se agrupan en tres curvas claramente definidas y estas configuran la arquitectura normal. • Curva de linfocitos cóncava 50-100 fL • Curva de mononucleares plana a cóncava 100- 150 fL. • Curva de granulocitos cóncava 150-380 fl
  • 52. HISTOGRAMA DE LEUCOCITOS Recuento total de Leucocitos 90 160 Linfocitos MO – MID = Eosinófilo, Basófilo, Monocito MO o MID Granulocitos Neutrófilos EJEMPLO DE ANALISIS DISTRIBUCIÓN NORMAL WBC 8.3 LY # 2.5 MO # .8 GR # 5.1 50 100 300200 400WBC REL NIo.
  • 55. INTERFERENCIA CELULAR Conteo de precursores celulares, parásitos, etc.
  • 57. GRANULOCITOPENIA UNION DE LA CURVA MONO CON LA GRANULOCITICA
  • 58. Aumento cónico sin perdida de arquitectura Leucocitosis, Linfocitos atipicos, monocitos activados.
  • 61. GRANULO-MONOCITOSIS UN AUMENTO EN ALGUNA DE ESTAS 2 LINEAS PUEDE OCACIONAR LA UNION ENTRE AMBAS CURVAS.
  • 63. Neutrofilia HAL REVISAR EL FSP : Neutrofilia, aumento de BANDAS HIpersegmentados
  • 65. Procesos malignos Medula osea Alteración hemática completa
  • 66. Bloques Los bloques en la distribución del histograma se presenta cuando el número de células está disminuido (-1000) y se hace necesario aumentar los intervalos
  • 67. leucocitosis Valores sobrepasan a los que la maquina puede contar Entre 2000 – 100 000
  • 69. dispersograma Gráfico que representa la distribución de dos variables en una población de muestra. Una variable se representa gráficamente en el eje vertical; la otra en el horizontal. Un dispersograma demuestra el grado o tendencia de presentación de las variables en relación mutua.
  • 70. DISPERSOGRAMA Cuadrante 1 Blastos Cuadrante 2 Linfocitos Cuadrante 3 Monocitos Cuadrante 2 Linfocitos Cuadrante 4 Neutrofilos Cuadrante 6 Eosinófilos Cuadrante 5 Cel. Dañadas
  • 71. cuadrantes  Cuadrante 1: Tenemos en este grupo núcleos de normoblastos, agregados plaquetarios, macroplaquetas, forma adultas de plasmodium, sombras nucleares y células de difícil hemólisis como drepanocitos.  Cuadrante 2: Normalmente se ubican los linfocitos en la región central derecha, la aparición de células en la región superior e inferior derecha hacen sospechar lapresencia de linfocitos atípicos. En la zona superior central se sospecha la presencia de blastos.  Cuadrante 3: Encontramos el registro de monocitos hacia la región central derecha, la presencia de células en la región central superior hace sospechar la presencia de blastos.
  • 72. cuadrantes  Cuadrante 4: Se ubican en la zona central el registro normal de neutrófilos; la aparición de células inmaduras de esta línea celular se registra en la región superior de dicho cuadrante; la presencia de neutrófilos de registro pequeños y los macropolicitos, se da en la parte inferior del mismo cuadrante.  Cuadrante 5: normalmente no presenta células, cuando allí por alguna razón se encuentran células estas pueden relacionarse con células dañadas de sangre envejecida.  Cuadrante 6: En la región central de este cuadrante podemos encintrar el registro deeosinòfilos, así mismo por la densidad de los puntos registrados podemos sospechar el aumento de este tipo de células
  • 74. DISPERSOGRAMA ANORMAL 4 1. Blastos 2. Granulocitos inmaduros 3. Neutrófilos envejecidos y lesionados 4. Plaquetas gigantes 5. Eritrocitos nucleados 6. Linfocitos Variantes 7. Blastos 8. Linfocitos Variantes 9. Blastos 5 9 2 7 8 3 6 1
  • 82. Bibliografía  Fundamentos de Hematología, Dr. Guillermo Ruiz Arguelles.  Diagnóstico y Tratamiento Clínicos por el laboratorio, John Bernard Henry.  Hematología: La sangre y sus enfermedades, Dr. José Carlos Jaime Pérez.  Hemograma, Como hacer e interpretar, Dr. Raimundo Antonio Gomes Oliveira.  Hematología, Guía práctica para el diagnóstico microscópico, Dr. Mathias Freund.  Artículo de revisión, Semiología de la Citometría hemática, Revista de la facultad de medicina UNAM, Dr. Rafael Hurtado Monroy.