2. TÉCNICA HISTOLOGICA
Se denomina al conjunto de procedimientos
aplicados a un material biológico (animal o
vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle
las condiciones óptimas para poder observar,
examinar y analizar sus componentes
morfológicos a través de los microscopios
fotónicos y electrónicos.
3. HISTOQUIMICA
Es el estudio de los componentes tisulares y celulares
por medio de colorantes especiales, reacciones
bioquímicas y reacciones inmunológicas.
4. TECNICAS DE HISTOQUIMICA
Es el estudio químico de los tejidos,
independientemente del método de análisis empleado,
con el auxilio de los microscopios ópticos (MO) y
electrónico (ME).
Esta técnica permite la identificación y localización de
compuestos o radicales químicos en las células y
tejidos.
5. B. PRINCIPALES SUSTANCIAS DE INTERÉS BIOLÓGICO DEMOSTRABLE
HISTOQUÍMICAMENTE.
1. IONES
IÓN HIERRO- EL ión férrico se demuestra por la
reacción con la mezcla de ferro- cianuro potásico y
ácido clorhídrico (azul de Prusia) que forma un
precipitado azul oscuro de ferrocianuro férrico.
- Sirve para localizar los macrófagos del SRE en el
hígado y diagnosticar enfermedades en las cuales hay
depósitos de hierro en los tejidos. Por ejemplo
hemocromatosis y hemosiderosis.
6. 2. LÍPIDOS.
Se usan colorantes que se disuelven en las grasas como
el Sudan IV y el Sudan negro.
Sirven para el diagnóstico de enfermedades
metabólicas que producen depósitos intracelulares de
lípidos.
Por ejemplo Enf. de Gaucher, Enf. de Niemann-
Pick, Enf. de Fabry, esteatosis hepática (hígado graso).
7. 3. ÁCIDOS NUCLÉICOS.
DNA .-Se usa la reacción de FEULGEN que consiste :
- Hidrólisis del DNA con ácido clorhídrico para extraer
las bases púricas y dejar en libertad los grupos
aldehídicos del azucar.
- El reactivo de SCHIFF (PAS) reacciona con el
aldehído y forma un precipitado rojo.
RNA.-Tiene gran afinidad por los colorantes básicos
(basofília) lo que hace que se tiña intensamente con el
AZUL DE TOLUIDINA o de METILENO.
8. 4. PROTEÍNAS
Su identificación se basa en métodos de detección
de aminoácidos.
- Reacción de aminobenceno.
- Reacción de Sakaguchi que detecta la arginina de
las proteínas básicas como las histonas y
protaminas.
Para Dx. de proteinosis pulmonar.
9. 5.- POLISACARIDOS
La reacción más usada es la del PAS (ácido periódico-Schiff). El ácido
oxida a los azucares en posición 1-2 y deja grupos aldehídos libres que
reaccionan con el reactivo de SchifF dando un compuesto de color
magenta . De este modo se demuestra la presencia de:
- Glucógeno en el hígado y músculo.
- Depósito intracelular de glucógeno en enfermedades congénitas.
- Glucosaminoglicano o mucopolisacárido que forman parte de los
proteoglicanos.
- Glucoproteínas.
Los azucares ácidos también reaccionan con el colorante AZUL DE
ALCIAN.
10. 6.- ENZIMAS
FOSFATASA ÁCIDA
Se usa el método de GOMORI que consiste en incubar
cortes de tejidos en una solución que contengan
glicerol fosfato sódico y nitrato de plomo a pH 5 .
Se usa para localizar lisosomas.
DESHIDROGENASAS
Se usan cortes no fijados junto con tetrazol para
formar un precipitado coloreado llamado formazan.
Se usa para detectar mitocondrias.
11. TINCION DE PAS (ácido peryódico de Schiff)
Se utiliza para la detección
de hidratos de carbono,
libres o conjugados, en los
tejidos cuando están en
cantidades relativamente
grandes. La modificación
química del tejido consiste
en la oxidación mediante el
ácido periódico de los
enlaces entre los carbonos
próximos que contienen
grupos hidroxilos. Esto
provoca la formación grupos
aldehídos que serán
reconocidos por el reactivo
de Schiff, el cual se
combinará con ellos para dar
un color rojizo brillante.
12.
13. Inmunohistoquímica. Técnica de tinción que permite
demostrar una variedad de antígenos presentes en las
células o tejidos utilizando anticuerpos marcados.
Estas técnicas se basan en la capacidad de los
anticuerpos de unirse a sus antígenos.
14. TINCION PARA AMILOIDE
La tinción de Rojo Congo
seguida de visión al
microscopio con luz normal
(Fig. 4a) o polarizada (con la
que se observa refringencia
de color verde manzana)
(Fig. 4b) es la técnica más
práctica para demostración
de sustancia amiloide.
16. INMUNOCITOQUIMICA (INMUNOFLUORESCENCIA)
Sirve para identificar proteínas especificas. Se basa en
la reacción Ag-Ac. Al Ac se le puede marcar con un
compuesto fluorescente. Es el método más usado para
la detección de auto-anticuerpos en enfermedades
autoinmunes.
