1. DESENVOLVIMENTO DE CÉLULAS GERMINATIVAS
DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO
EM CAMUNDONGOS
Germ cell development in equine testis tissue
xenografted into mice
Reproduction Researsh, 2006
Pedro Augusto Cordeiro Borges

2. 2
Introdução
 Enxerto de diferentes espécies em camundongos
Eficiência da espermatogênese
* Eficiente * Ineficiente
- Porcos - Gatos
- Bodes - Macacos
-Touros
Honaramooz, 2002
Honaramooz,Oatley;Snedaker, 2004; Rathi, 2005

3. 3
Introdução
 Enxerto de tecido testicular equino não relatado
Modelo in vivo - entendimento da espermatogênese
- tratamentos semelhantes
- cavalos valiosos
- animais experimentais castração ou morte
- descendência por ICSI
(Cochran et al. 1998)

4. 4
Introdução
Gonadotrofinas  crescimento e
desenvolvimento testicular
Enxerto em camund. Castrado 
gonadotrofinas endogenas
LH  Leyding  testosterona 
Feedback
Diferenças  ↓ eficiência da
espermatogênese
Suplementação com gonadotrofinas 
melhorar a espermatogênese

5. 5
Objetivo
Eficiência da espermatogênese
Efeito da administração de gonadotrofinas

6. 6
Material e Métodos

7. 7
Material e Métodos
• Experimento 1
Standardbred
2 semanas Welsh pony
Warmblood
5 meses Quarterhorse
10 meses Thoroughbred
12 meses
4 anos

8. 8
Material e Métodos
• Experimento 1
 Remoção da cápsula e do
tecido conjuntivo
 1 – 2 mm
 Dulbecco’s
Eagle’s

9. 9
Material e Métodos
• Experimento 1
 6 semanas
 Imunossuprimidos

10. 10
Material e Métodos
• Experimento 1
 Anestesiados e castrados Comissão Institucional de
Usos e Cuidados com os
Animais – Universidade da
Pensilvânia
 Base
histológica

11. 11
Material e Métodos
• Experimento 2
Shetland pony Thoroughbred
8 meses 12 meses
 PSMG 10 UI
 14 semanas após  hCG 10 UI  25 semanas após
 20 semanas  10 semanas

12. 12
Material e Métodos
• Recuperação e analise dos tecidos transplantados
• Inalação
Eutanásia de CO2
• Solução de
Fixação Bouin’s
• Etanol
Banhos 70%
Parafina • Histologia

13. 13
Material e Métodos
• Recuperação e analise dos tecidos transplantados
 Todos os túbulos seminíferos avaliados
 Maturação  lúmen e espermatogênese
 Células germinativas  morfologia e localização
 Túbulos degenerados  sem distinção de tipos celulares

14. 14
Material e Métodos
• Recuperação e analise dos tecidos transplantados
 Tecidos saudáveis x degenerados
 Apenas os saudáveis analisados
 Camundongo = unidade experimental
 Vesículas seminais pesadas  secreção de testosterona

15. 15
Análise estatística
NRC-nude e ICR-scid
Chi-square ou Student
 ANOVA
SigmaStat 3.0
Média e Desvio
P< 0,05

16. 16
Resultados

17. 17
Experimento 1

18. 18
Resultados
Figura 1. Porcentagem de tecidos saudáveis recuperados por doador, 4 ou 8
meses após o enxerto (n=6 receptores por doador)
% de tecidos saudáveis recuperados
 65 % saudáveis
93,8%
 2-4 vezes maior
84,6%
65%
56,3%
20,3%
Idade do doador

19. 19
Resultados
• Espermatogênese e desenvolvimento dos túbulos seminíferos
 Células intersticiais e poucos cordões
 Espermatogônias
 Tecidos recuperados (4 e 8 meses)  pouco desenvolvidos
- 35, 7% cordões  túbulos
- 52 % degenerados
- Espermatogônias
- Após 8 meses  lóbulos mais aparente

20. 20
Resultados Welsh pony
5 meses
Figura 2. A porcentagem de túbulos
Porcentagem de túbulos seminíferos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
tecido proveniente do Welsh pony - 5 meses
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – cachos e arranjo em lóbulos
8 – espermatócitos em paquíteno
4,8 0,8 % de túbulos
degenerados
Tempo em meses

21. 21
Resultados Welsh pony
5 meses
Figura 3. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Welsh pony – 5 meses),
antes de transplantado (A), apresentando apenas espermatogônias , e recuperado
após 8 meses (B), apresentando espermatócitos em paquíteno.

22. 22
Resultados Warmblood
10 meses
Figura 4. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
Porcentagem de túbulos seminíferos
germinativa indicada é demonstrada para o
tecido proveniente do Warmblood 10 meses
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Espermatócitos em paquíteno
4 – Redução significativa
8 – Espermátides alongadas
7,7 1,5 % de túbulos degenerados
Tempo em meses

23. 23
Resultados Warmblood
10 meses
Figura 5. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Warmblood– 10 meses),
antes de transplantado (C), apresentando espermatócitos em paquíteno como o
tipo celular mais maduro, e recuperado após 8 meses (D), apresentando
espermátides alongadas.

24. 24
Quarterhorse
Resultados 12 meses
Figura 6. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
Porcentagem de túbulos seminíferos
tecido proveniente do Quarterhorse12 meses
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Espermátides alongadas
4 – Espermatócitos em paquíteno
8 – Retomada da espermatogênese
6,5 2,2 % de túbulos degenerados
Tempo em meses

25. 25
Quarterhorse
Resultados 12 meses
Figura 7. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Quarterhorse – 12
meses), antes de transplantado (E), apresentando espermatogênese completa e
recuperado após 8 meses (F), apresentando espermatócitos em paquíteno como o
tipo celular mais maduro.

26. 26
Thoroughbred
Resultados 4 anos
Figura 8. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
Porcentagem de túbulos seminíferos
germinativa indicada é demonstrada para o
tecido proveniente do Thoroughbred 4 anos
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Espermátides alongadas
4 – Redução significativa
8 – Retomada da espermatogênese
46,8 13,9 % de túbulos degenerados
Tempo em meses

27. 27
Thoroughbred
Resultados 4 anos
Figura 9. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Thoroughbred – 4 anos),
antes de transplantado (G), apresentando espermatogênese completa e
recuperado após 8 meses (H), apresentando espermatócitos em paquíteno como o
tipo celular mais maduro.

28. 28
Experimento 2

29. 29
Resultados
• Efeito da gonadotrofina nos tecidos enxertados (experimento 2)
- Antes do transplante
 Thoroughbred e Welsh pony  espermatogônias
- 3 tratados com gonadotrofina
- 3 grupo controle
10 semanas 20 semanas
 Recuperados  8 meses

30. 30
Resultados
• Welsh pony – 8 meses
Porcentagem de túbulos seminíferos
Figura 10. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
grupo controle e o grupo tratado com
gonadotrofina, com tecidos provenientes do
doador de 8 meses de idade.
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Gonócitos
8 – Espermatócitos em paquíteno
Tempo em meses 8 - Espermatides alongadas

31. 31
Resultados
Antes Controle Tratado - gonadotrofina
Figura 11. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 8 meses, antes
do transplante (A) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (B) e
para o grupo tratado com gonadotrofina (C).

32. 32
Resultados
• Thoroughbred – 12 meses
Figura 10. A porcentagem de túbulos
Porcentagem de túbulos seminíferos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
grupo controle e o grupo tratado com
gonadotrofina, com tecidos provenientes do
doador de 12 meses de idade.
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Gonócitos
8 – Espermatogônias
8 - Espermatócitos em paquíteno
Tempo em meses

33. 33
Resultados
Figura 13. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 12 meses, antes
do transplante (D) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (E) e
para o grupo tratado com gonadotrofina (F).

34. 34
Resultados
• Peso das vesículas seminais
 177 30.8 mg  4 meses após o transplante
130.9 27.4 mg  8 meses após o transplante
Sem tecidos saudáveis  15.6 2.7 mg
Tecido equino transplantado  produção de testosterona
Administração de gonadotrofina  sem significância

35. 35
Considerações finais
 Espermatogênese até meiose
Gonadotrofinas exógenas
Tecido testicular de equinos – modelo – espermatogênese
Fisiologia e Fisiopatologia

36. DESENVOLVIMENTO DE CÉLULAS GERMINATIVAS
DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO
EM CAMUNDONGOS
Germ cell development in equine testis tissue
xenografted into mice
Reproduction Researsh, 2006
Pedro Augusto Cordeiro Borges