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Debajo de las sustancias extracelulares, como son las cápsulas y cubiertas mucilaginosas, y en la periferia de una delicada membrana que está en  inmediato contacto con el citoplasma, se encuentra la  Pared Celular , que esta formada a base de aminoácidos, azucares y grasas y ellas están entrelazadas formando un polímero complejo. La pared celular brinda una estructura rígida que  da  forma  a  la  célula y  estas  pueden destruirse o romperse en condiciones  especiales.  Entre  los  constituyentes de la pared Celular  de  las  bacterias  Gram (+) y Gram negativas Existen  importantes  diferencias.  PARED CELULAR:
BACTERIA GRAM POSITIVA Tiene una capa gruesa de Peptidoglicano (mureina) y dos clases de ácidos  teicoicos:  Ácido Lipoteicoico  que está en la superficie, empotrado en la capa de  peptidoglicano y unido a la membrana citoplásmica. Y  Ácido teicoico  de la Pared que está en la superficie y se une sólo a la capa de peptidoglicano.   El ácido  Teicoico es el  responsable  del  determinante  antigénico del  organismo .
BACTERIA GRAM NEGATIVA Tiene una capa delgada de  Peptidoglicano  (mureina) unida a una membrana  exterior por  lipoproteínas . La membrana exterior está hecha de proteína,  fosfolípido y  lipopolisacárido . En el lipopolisacárido, la porción de lípido está  embebida en el fosfolípido y el  antígeno O polisacárido está en la superficie . El lípido se llama  Lípido A  y es tóxico, pero el lipopolisacárido entero se llama  Endotoxina . La pared de la célula tiene poros llamado Porines para el transporte de substancias de peso molecular bajo.  Entre  la  membrana  citoplásmica  y  la  pared  celular  hay  un  espacio  periplásmico con enzimas  hidrolíticas,  enzimas  inactivadoras  de  antibióticos  y  proteínas  de transporte.
MEMBRANA CITOPLÁSMICA (CITOPLASMÁTICA O PROTOPLASMÁTICA) Inmediatamente debajo de la Pared  Celular, existe una membrana fina,  O  envoltura,  que  se  denomina  Membrana  citoplásmica   y  está  Formada  por  una  bicapa  de  fosfolípido  integral  y  proteínas  periféricas empotradas.  Se  trata  de  una  membrana  semipermeable, selectiva, que controla el paso de  Los  elementos  nutritivos  dentro  de  la  célula  y  la  salida  de  los productos de  desecho. Tiene enzimas respiratorias y durante la división celular  el  cromosoma  Se une a la membrana de la célula en el sitio llamado Mesosoma.
CITOPLASMA El material celular contenido dentro de Ia membrana citoplásmica puede dividirse  en  Tres  Partes,  Región  Citoplásmica , de apariencia granular, la cual es rica en RNA,  Región Nuclear   o Cromatínica , que es rica en DNA, y la parte líquida que mantiene disueltos los elementos nutritivos.  El RNA,  combinado  con proteínas, forma partículas  o  corpúsculos  macromoleculares,  de  unos  200A  de  diámetro,  que  forman  una  masa  densa y compacta en todo  el  citoplasma.  Estas  Partículas de  RNA-proteína  se denominan Ribosomas .
CLASIFICACIÓN BACTERIANA
Dentro de las Eubacterias existen tres grupos de bacterias que pueden ser diferenciados en relación a la  Estructura de la Pared Celular . La forma más  sencilla de iniciar una identificación del microorganismo que se desea estudiar  es realizar una coloración o  Tinción de Gram . La tinción de Gram es una  Tinción Diferencial  porque no todas las células se tiñen de la misma manera y permite  discriminar entre dos grandes grupos de Eubacterias, las Eubacterias  Gram Positivas y Gram Negativas .  Staphylococcus aureus Escherichia coli
CLASIFICACIÓN SEGÚN TINCIÓN DE LA PARED CELULAR ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
CLASIFICACIÓN SEGÚN AGRUPACIÓN ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
CLASIFICACIÓN  SEGÚN FORMA Y TINCIÓN ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
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Los microorganismos Gram positivos,  como el  Staphylococcus  aureus ,  adquieren un color violeta después de  la coloración  de Gram debido a  que contienen una pared celular estructuralmente muy diferente a la de  los  microorganismos  Gram  negativos,  como  la  Escherichia coli , que  adquieren un color  rosado.  El  tercer  grupo  de Eubacterias  es  el  de  los  Bacilos  Acido-Alcohol  Resistentes  (BAAR)  que  pueden  ser  diferenciados  utilizando  la  coloración  de  Ziehl-Neelsen. La diferencia  en  la coloración  no  se  debe  a  reacciones  químicas  con  ciertos  componentes de la pared sino a la estructura física de la misma.
Las  Eubacterias  Gram  positivas son células que contienen una membrana  citoplasmática  con  fosfolípidos  y  proteínas.  Por  fuera  de  la  membrana  citoplasmática se encuentra la  Pared Celular   que está compuesta por una  ancha capa de  Peptidoglicano.  Este Peptidoglicano es una macromolécula  gigante formada por cadenas de un dímero compuesto por:  N-acetilglucosamina  y  N-acetilmurámico.   A  su  vez,  estas  cadenas se  encuentran unidas entre sí mediante  Péptidos . Estos puentes peptídicos son  característicos  de  las  distintas  bacterias y presentan mayor rigidez cuanto más  completo  sea  el  entrecruzamiento.  El  Peptidoglicano  es  una Malla Porosa   que  otorga  forma  y  rigidez a la célula, y evita que la célula estalle  en  medios  hipotónicos. Al ser porosa permite el paso de nutrientes  desde  el  exterior  y  el  movimiento  de  enzimas  catalíticas y productos de  secreción hacia el exterior de la célula.
La pared celular Gram positiva también contienen  Ácidos Teicoicos  y  Ácidos Lipoteicoicos .  Los ácidos  teicoicos son cadenas de  ribitol  o  glicerol   unidas  por  fosfodiésteres, y están unidos covalentemente al peptidoglicano  por  medio  de  grupos  fosfodiéster en el oxihidrilo del  C 6  del N-acetilmurámico.  Los  ácidos  lipoteicoicos  son  polímeros de  glicerofosfato se encuentran anclados en la membrana  citoplasmática  y no están unidos al peptidoglicano.  La  función de  estos compuestos  sería estructural,  pero  existen  evidencias  que  indican  que  también  participarían en la regulación de las enzimas hidrolíticas que renuevan  la pared celular  (autolisisnas).
Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram Positiva
Bacterias Gram (+)
 
PEPTIDOGLICANO  Esquema de la estructura del peptidoglicano del  Staphylococcus aureus
Síntesis del  Peptidoglicano de una Eubacteria
Tinción GRAM: Bacterias  Gram-Positivas
 
Las  Eubacterias  Gram negativas son células rodeadas por una membrana  citoplasmática formada por una bicapa fosfolipídica y proteínas. Por encima  de  esta  membrana  se encuentra una fina capa de  peptidoglicano  que se  halla  unida covalentemente a  unas  Lipoproteínas de Anclaje  que fijan la  Membrana Externa  por medio de porciones lipofílicas.  Entre  la membrana  citoplasmática  y  la  membrana  externa  queda  delimitado  el  Espacio  Periplásmico .  Este  espacio  es  ocupado  por  el  Periplasma   que es una  matriz  isotónica  respecto  al  citoplasma,  isotonicidad  que  es  mantenida  mediante  los  oligosacáridos  derivados  de  membrana  (MDO) ,  y en la  que  se  hallan  componentes  catalíticos  de  suma  importancia  para  la  viabilidad celular.  La  membrana  externa tiene una estructura de bicapa asimétrica en donde  la  cara  externa  esta  compuesta  por el  Lipopolisacarido (LPS)  y la cara  interna por fosfolípidos.
Además,  esta  membrana  es  rica  en  proteínas,  algunas de las cuales se  denominan  Porinas .  La  membrana  externa  funciona  como  una  barrera  de  permeabilidad para ciertas sustancias como antimicrobianos y enlentece  el  pasaje  de  otros  que  son  inactivados  en  el  periplasma.  El  LPS  está  formado por tres regiones: el  polisacárido O (Antígeno O) , el  polisacárido  del  centro  (KDO)   y  el  lípido A (Endotoxina) . La presencia del LPS en la  membrana  externa  le  confiere  a  la  célula  una efectiva protección contra  enzimas  digestivas  y  detergentes  como  las  sales  biliares,  y  dota  a  la  superficie  bacteriana con una fuerte hidrofilicidad que le permite a  la célula  evadir  la  fagocitosis,  tener  cierta  resistencia  al  complemento,  evitar  la  respuesta  inmune  específica  por  alteración  de  la  superficie antigénica y  adherirse  a  ciertas  células  del  hospedador.  Las  porinas  son  poros  o  canales  proteicos  no  específicos  que  pueden  ser  atravesados  por  pequeñas  moléculas  hidrofílicas.  En  la membrana externa se encuentran  otras  proteínas  que  funcionan  como  canales  de  difusión  específicos  y  facilitan el paso de di, tri y oligosacáridos.
Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram Negativa
Bacterias Gram (-)
 
 
Esquema de la estructura del peptidoglicano de la  Escherichia coli   PEPTIDOGLICANO
TINCIÓN GRAM: BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS Cocos Gram - Negativos Cocobacilos:   forma usual de Acinetobacter sp, que puede ser Gram (+) o Gram (-), y, a menudo, Gram variable Cocobacilos
 
 
TINCIÓN DE ESPORAS
TINCIÓN DIFERENCIA: Tinción de Ziehl-Neelsen (ácido-alcohol resistencia)  Es un tipo especial de tinción que permite la identificación de  microorganismos de los grupos  Mycobacterium  y  Nocardia  de  gran relevancia clínica
TINCIÓN DE CÁPSULAS Se trata de una tinción negativa usando tinta china que permite determinar la presencia de cápsulas polisacarídicas
TINCIÓN DE FLAGELOS Permite teñir flagelos usando un  mordiente para incrementar su  grosor y hacerlos visibles al  microscopio óptico.
 
 
 

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Gram Positivos y Negativos

  • 1.  
  • 2. Debajo de las sustancias extracelulares, como son las cápsulas y cubiertas mucilaginosas, y en la periferia de una delicada membrana que está en inmediato contacto con el citoplasma, se encuentra la Pared Celular , que esta formada a base de aminoácidos, azucares y grasas y ellas están entrelazadas formando un polímero complejo. La pared celular brinda una estructura rígida que da forma a la célula y estas pueden destruirse o romperse en condiciones especiales. Entre los constituyentes de la pared Celular de las bacterias Gram (+) y Gram negativas Existen importantes diferencias. PARED CELULAR:
  • 3. BACTERIA GRAM POSITIVA Tiene una capa gruesa de Peptidoglicano (mureina) y dos clases de ácidos teicoicos: Ácido Lipoteicoico que está en la superficie, empotrado en la capa de peptidoglicano y unido a la membrana citoplásmica. Y Ácido teicoico de la Pared que está en la superficie y se une sólo a la capa de peptidoglicano. El ácido Teicoico es el responsable del determinante antigénico del organismo .
  • 4. BACTERIA GRAM NEGATIVA Tiene una capa delgada de Peptidoglicano (mureina) unida a una membrana exterior por lipoproteínas . La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido . En el lipopolisacárido, la porción de lípido está embebida en el fosfolípido y el antígeno O polisacárido está en la superficie . El lípido se llama Lípido A y es tóxico, pero el lipopolisacárido entero se llama Endotoxina . La pared de la célula tiene poros llamado Porines para el transporte de substancias de peso molecular bajo. Entre la membrana citoplásmica y la pared celular hay un espacio periplásmico con enzimas hidrolíticas, enzimas inactivadoras de antibióticos y proteínas de transporte.
  • 5. MEMBRANA CITOPLÁSMICA (CITOPLASMÁTICA O PROTOPLASMÁTICA) Inmediatamente debajo de la Pared Celular, existe una membrana fina, O envoltura, que se denomina Membrana citoplásmica y está Formada por una bicapa de fosfolípido integral y proteínas periféricas empotradas. Se trata de una membrana semipermeable, selectiva, que controla el paso de Los elementos nutritivos dentro de la célula y la salida de los productos de desecho. Tiene enzimas respiratorias y durante la división celular el cromosoma Se une a la membrana de la célula en el sitio llamado Mesosoma.
  • 6. CITOPLASMA El material celular contenido dentro de Ia membrana citoplásmica puede dividirse en Tres Partes, Región Citoplásmica , de apariencia granular, la cual es rica en RNA, Región Nuclear o Cromatínica , que es rica en DNA, y la parte líquida que mantiene disueltos los elementos nutritivos. El RNA, combinado con proteínas, forma partículas o corpúsculos macromoleculares, de unos 200A de diámetro, que forman una masa densa y compacta en todo el citoplasma. Estas Partículas de RNA-proteína se denominan Ribosomas .
  • 8. Dentro de las Eubacterias existen tres grupos de bacterias que pueden ser diferenciados en relación a la Estructura de la Pared Celular . La forma más sencilla de iniciar una identificación del microorganismo que se desea estudiar es realizar una coloración o Tinción de Gram . La tinción de Gram es una Tinción Diferencial porque no todas las células se tiñen de la misma manera y permite discriminar entre dos grandes grupos de Eubacterias, las Eubacterias Gram Positivas y Gram Negativas . Staphylococcus aureus Escherichia coli
  • 9.
  • 10.
  • 11.
  • 12.
  • 13.
  • 14.
  • 15. Los microorganismos Gram positivos, como el Staphylococcus aureus , adquieren un color violeta después de la coloración de Gram debido a que contienen una pared celular estructuralmente muy diferente a la de los microorganismos Gram negativos, como la Escherichia coli , que adquieren un color rosado. El tercer grupo de Eubacterias es el de los Bacilos Acido-Alcohol Resistentes (BAAR) que pueden ser diferenciados utilizando la coloración de Ziehl-Neelsen. La diferencia en la coloración no se debe a reacciones químicas con ciertos componentes de la pared sino a la estructura física de la misma.
  • 16. Las Eubacterias Gram positivas son células que contienen una membrana citoplasmática con fosfolípidos y proteínas. Por fuera de la membrana citoplasmática se encuentra la Pared Celular que está compuesta por una ancha capa de Peptidoglicano. Este Peptidoglicano es una macromolécula gigante formada por cadenas de un dímero compuesto por: N-acetilglucosamina y N-acetilmurámico. A su vez, estas cadenas se encuentran unidas entre sí mediante Péptidos . Estos puentes peptídicos son característicos de las distintas bacterias y presentan mayor rigidez cuanto más completo sea el entrecruzamiento. El Peptidoglicano es una Malla Porosa que otorga forma y rigidez a la célula, y evita que la célula estalle en medios hipotónicos. Al ser porosa permite el paso de nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catalíticas y productos de secreción hacia el exterior de la célula.
  • 17. La pared celular Gram positiva también contienen Ácidos Teicoicos y Ácidos Lipoteicoicos . Los ácidos teicoicos son cadenas de ribitol o glicerol unidas por fosfodiésteres, y están unidos covalentemente al peptidoglicano por medio de grupos fosfodiéster en el oxihidrilo del C 6 del N-acetilmurámico. Los ácidos lipoteicoicos son polímeros de glicerofosfato se encuentran anclados en la membrana citoplasmática y no están unidos al peptidoglicano. La función de estos compuestos sería estructural, pero existen evidencias que indican que también participarían en la regulación de las enzimas hidrolíticas que renuevan la pared celular (autolisisnas).
  • 18. Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram Positiva
  • 20.  
  • 21. PEPTIDOGLICANO Esquema de la estructura del peptidoglicano del Staphylococcus aureus
  • 22. Síntesis del Peptidoglicano de una Eubacteria
  • 23. Tinción GRAM: Bacterias Gram-Positivas
  • 24.  
  • 25. Las Eubacterias Gram negativas son células rodeadas por una membrana citoplasmática formada por una bicapa fosfolipídica y proteínas. Por encima de esta membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano que se halla unida covalentemente a unas Lipoproteínas de Anclaje que fijan la Membrana Externa por medio de porciones lipofílicas. Entre la membrana citoplasmática y la membrana externa queda delimitado el Espacio Periplásmico . Este espacio es ocupado por el Periplasma que es una matriz isotónica respecto al citoplasma, isotonicidad que es mantenida mediante los oligosacáridos derivados de membrana (MDO) , y en la que se hallan componentes catalíticos de suma importancia para la viabilidad celular. La membrana externa tiene una estructura de bicapa asimétrica en donde la cara externa esta compuesta por el Lipopolisacarido (LPS) y la cara interna por fosfolípidos.
  • 26. Además, esta membrana es rica en proteínas, algunas de las cuales se denominan Porinas . La membrana externa funciona como una barrera de permeabilidad para ciertas sustancias como antimicrobianos y enlentece el pasaje de otros que son inactivados en el periplasma. El LPS está formado por tres regiones: el polisacárido O (Antígeno O) , el polisacárido del centro (KDO) y el lípido A (Endotoxina) . La presencia del LPS en la membrana externa le confiere a la célula una efectiva protección contra enzimas digestivas y detergentes como las sales biliares, y dota a la superficie bacteriana con una fuerte hidrofilicidad que le permite a la célula evadir la fagocitosis, tener cierta resistencia al complemento, evitar la respuesta inmune específica por alteración de la superficie antigénica y adherirse a ciertas células del hospedador. Las porinas son poros o canales proteicos no específicos que pueden ser atravesados por pequeñas moléculas hidrofílicas. En la membrana externa se encuentran otras proteínas que funcionan como canales de difusión específicos y facilitan el paso de di, tri y oligosacáridos.
  • 27. Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram Negativa
  • 29.  
  • 30.  
  • 31. Esquema de la estructura del peptidoglicano de la Escherichia coli PEPTIDOGLICANO
  • 32. TINCIÓN GRAM: BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS Cocos Gram - Negativos Cocobacilos: forma usual de Acinetobacter sp, que puede ser Gram (+) o Gram (-), y, a menudo, Gram variable Cocobacilos
  • 33.  
  • 34.  
  • 36. TINCIÓN DIFERENCIA: Tinción de Ziehl-Neelsen (ácido-alcohol resistencia) Es un tipo especial de tinción que permite la identificación de microorganismos de los grupos Mycobacterium y Nocardia de gran relevancia clínica
  • 37. TINCIÓN DE CÁPSULAS Se trata de una tinción negativa usando tinta china que permite determinar la presencia de cápsulas polisacarídicas
  • 38. TINCIÓN DE FLAGELOS Permite teñir flagelos usando un mordiente para incrementar su grosor y hacerlos visibles al microscopio óptico.
  • 39.  
  • 40.  
  • 41.