4. PROCEDIMIENTO
El procedimiento general comienza Los sistemas de capilaridad iónica se
con la extracción del RNA total de utilizan para transferir el ARN desde
una muestra de tejido un gel de electroforesis a una
homogenizado. membrana de Northern blot.
Después del marcaje de la sonda,
Las muestras de ARN son entonces ésta se hibrida con el RNA en la
separadas por electroforesis en gel. membrana.
Dada la fragilidad de los geles y la Finalmente, la membrana debe de
incapacidad de las sondas para lavarse para asegurar que la sonda se
penetrar en la matriz, las muestras de ha unido de forma específica y para
RNA, separadas por tamaño tras la evitar ruido de fondo en las señales
electroforesis, serán transferidas a emitidas por la misma.
una membrana de Nailon por medio
de capilaridad o un sistema de
transferencia al vacío.
6. APLICACIONES
El northern Blot permite observar un
patrón particular de expresión Los patrones de expresión obtenidos
genética entre tejidos, órganos, nos ayudan a conocer las funciones
estadios del desarrollo, niveles de de los genes. Desde que el RNA se
estrés ambiental, infecciones separó por su tamaño, las sondas
causadas por patógenos y durante el contra el mismo pueden darnos una
curso del tratamiento de las mismas. idea de su tamaño, sugerir ayuste
alternativo, o motivos repetidos en la
secuencia.
La variación en el tamaño del
Esta técnica se ha utilizado para producto de un gen puede además
mostrar la sobreexpresión de indicarnos delecciones o errores en el
oncogenes y la desregulación de proceso de transcripción.
genes supresores tumorales en
células cancerosas cuando son Alterando la sonda podemos conocer
comparadas con tejidos normales. la secuencia e incluso determinar que
región del RNA ha sido deleccionada.
