Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật QF-PCR Trong Chẩn Đoán Trước Sinh Các Hội Chứng Lệch Bội NST Liên hệ tải :quangthuboss@gmail.com

1. NGƯỜI THỰC HIỆN
HV. NGUYỄN HOÀI NAM
HƯỚNG DẪN KHOA HỌC
TS. HOÀNG THỊ NGỌC LAN

2.  Định nghĩa dị tật bẩm sinh:
Theo WHO dị tật bẩm sinh là tất cả những bất thường cấu trúc,
chức năng hoặc sinh hoá có từ khi mới sinh cho dù các dị tật
đó có được phát hiện ở thời điểm đó hay không.
 Ảnh hưởng của dị tật bẩm sinh:
 Đối với trẻ:
+Nặng: ảnh hưởng đến khả năng sống
+Nhẹ: trí tuệ kém phát triển và thiếu hòa nhập cộng đồng.
 Đối với gia đình và xã hội: bất hạnh với gia đình và là gánh
nặng của xã hội.

3. Trisomy 21Trisomy 21
(DOWN)(DOWN)
1/700 LS1/700 LS
Trisomy 13Trisomy 13
(PATAU)(PATAU)
1/10000 LS1/10000 LS
KlinefelterKlinefelter
47,XXY47,XXY
1/1000 trẻ1/1000 trẻ
ss namss nam
Trisomy 18Trisomy 18
(EDWARDS)(EDWARDS)
1/7000 LS1/7000 LS

4.  Ứng dụng kỹ thuật QF-PCR trong chẩn đoán trước
sinh các hội chứng bất thường lệch bội NST.
 Đánh giá giá trị của kỹ thuật QF-PCR trong chẩn
đoán trước sinh một số hội chứng lệch bội NST.

5. Kỹ thuật di truyền tế bào Kỹ thuật Fish

6. •Nguyên tắc của kỹ thuật QF-PCR
Kỹ thuật QF – PCR sử dụng đoạn mồi có gắn huỳnh
quang để khuếch đại các vùng STR. Các vùng STR
được khuếch đại sẽ tạo ra các sản phẩm PCR huỳnh
quang khác nhau và được định lượng bằng điện di mao
quản trên hệ thống máy sequencing ABI. Kết quả sẽ
hiển thị bằng các đỉnh

7. STR là gì

8. NST
của
cha
NST
của
mẹ

9. A
2:1:TRISOMI1:1:1 :TRISOMI

11. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP
NGHIÊN CỨU

12.  Mẫu bệnh nhân:
- 29 mẫu dịch ối của những phụ nữ mang thai có các bất thường
NST chẩn đoán xác định bằng kỹ thuật di truyền tế bào tại Bộ
môn Sinh học Di truyền- Trường Đại học Y Hà Nôi.
 Mẫu chứng:
- 2 mẫu dịch ối của những phụ nữ mang thai bình thường cũng
được chẩn đoán xác định bằng kỹ thuật di truyền tế bào tại Bộ
môn Sinh học Di truyền- Trường Đại học Y Hà Nôi.

13. MẪU NƯỚC ỐI DNA NỒNG ĐỘ PHÙ
HỢP
QF-PCR
ĐIỆN DIPHÂN TÍCH
KẾT QUẢ
KIT Qiagen ĐO OD
BIẾN TÍNH
KIT
ANEUFAST
GENMAPPER
KARYOTYP

14. Bộ kit Aneufast
Primer gắn huỳnh quang
dNTP
Buffer
Taq DNA

15. 9
7
7
6

16. S1 S2 MXY M21 M18 M13
AMXY SRY SRY D21S1411 D18S386 D13S631
D21S1414 X22 AMXY D21S1435 D18S391 D13S634
D21S1446 DXYS218 HPRT D21S1437 D18S858 D13S742
D13S631 HPRT SBMA D21S1412 D18S499 D13S628
D13S305 D21S1411 DXS6803 D21S1008 D18S1002
D18S535 D21S1435 DXS6809
D18S391 D13S634 DXS8377
D13S258
D18S386
D18S390
7 10
4
3 3
2

17. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

18. Kết quả tách chiết DNA từ dịch ối
Mẫu Nồng độ DNA (ng/µl) Độ tinh sạch (A260/ A280) Mẫu Nồng độ DNA(ng/µl) Độ tinh sạch (A260/ A280)
1 19,4 1,76 16 34,1 1,95
2 20,1 1,72 17 11,0 1,77
3 21,1 1,85 18 10,0 1,88
4 6,1 1,56 19 5,4 2,1
5 2,6 2,3 20 45,9 1,86
6 10,2 2,08 21 35,8 1,94
7 4,7 1,75 22 6,6 2,03
8 13,9 1,65 23 30,1 2,03
9 10,3 1,82 24 10,2 2,2
10 7,3 1,68 25 7,8 1,9
11 10,5 1,68 26 13,2 1,78
12 18,6 2,05 27 22,1 1,83
13 20,7 1,72 28 10,6 1,7
14 25,8 1,82 29 30,5 1,92
15 6,7 1,56 30 16,6 1,74
31 10,5 1.82

19. Kỹ thuật QF-PCR
Chẩn đoán
Số mẫu
(n)
Tỷ lệ
(%)
Trisomy 21 16 51,62
Trisomy 18 08 25,81
Trisomy 13 02 6,45
1 NST X 01 3,22
Trisomy 4 NST 21,18,13,X
01 3,22
Bình thường,XY 01 3,22
Bình thường,XX 02 6,45

20. Bình thường,XY

21. KẾT QUẢ QF-PCR PHÙ HỢP VỚI KẾT QUẢ
KARYOTYP

22. Trisomi 21
2:1
1:1:1
2:1

23. KẾT QUẢ QF-PCR PHÙ HỢP VỚI KẾT QUẢ
KARYOTYP

24. Trisomi18
2:12:1
2:1 2:1

25. KẾT QUẢ QF-PCR PHÙ HỢP VỚI KẾT QUẢ
KARYOTYP

26. Trisomi13
2:1
1:1:1
1:1:1
1:1:1

27. KẾT QUẢ QF-PCR PHÙ HỢP VỚI KẾT QUẢ
KARYOTYP

28. Monosomi X

29. KẾT QUẢ QF-PCR PHÙ HỢP VỚI KẾT QUẢ
KARYOTYP

33. Kỹ thuật QF – PCR Kỹ thuật di truyền tế bào
Chẩn đoán
Số mẫu
(n)
Tỷ lệ
(%)
Chẩn đoán
Số mẫu
(n)
Tỷ lệ
(%)
Trisomy 21 16 51,62
47,XX,+21
hoặc 47,XY,+21
16 51,62
Trisomy 18 08 25,81
47,XX,+18
hoặc 47,XY,+18
08 25,81
Trisomy 13 02 6,45
47,XX,+13
hoặc 47,XY,+13
02 6,45
1 NST X 01 3,22 45,X 01 3,22
Trisomy 4 NST
21,18,13,X 01 3,22 69,XXX 01 3,22
Bình thường,XY 01 3,22 46,XY 01 3,22
Bình thường,XX 02 6,45
46,XX 01 3,22
46,XY 01 3,22

36. 1. Ứng dụng thành công kỹ thuật QF-PCR trong chẩn đoán
trước sinh lệch bội NST tại Trung tâm nghiên cứu Gen-
Protein, Trường Đại Học Y Hà Nội .
2. Giá trị của kỹ thuật QF – PCR
 Sử dụng kỹ thuật QF – PCR cho kết quả chẩn đoán
tươngđương như sử dụng kỹ thuật di truyền tế bào với độ
chính xác là 100% đối với các hội chứng bất thường lệch
bội NST.
 Khi phối hợp với di truyền tế bào đã phát hiện được 1
mẫu có mất đoạn nhánh ngắn
NST X.