Παρουσίαση για το κεφάλαιο Τεχνολογία του ανασυνδυασμένου DNA. Βιολογία θετικής κατεύθυνσης γ' λυκείου 2010

1. Δ. Κελεφιώτης 1
ΒΙΟΛΟΓΙΑΒΙΟΛΟΓΙΑ
θετικής κατεύθυνσηςθετικής κατεύθυνσης
Γ΄ ΤΑΞΗΣ ΕΝΙΑΙΟΥ ΛΥΚΕΙΟΥΓ΄ ΤΑΞΗΣ ΕΝΙΑΙΟΥ ΛΥΚΕΙΟΥ
Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης

2. Δ. Κελεφιώτης 2
ΚΕΦΑΛΑΙΟ 4ΚΕΦΑΛΑΙΟ 4οο
Τεχνολογία τουΤεχνολογία του
ανασυνδυασμένουανασυνδυασμένου DNADNA
 ΕισαγωγήΕισαγωγή
 Γονιδιωματική βιβλιοθήκηΓονιδιωματική βιβλιοθήκη
 cDNAcDNA βιβλιοθήκηβιβλιοθήκη
 Υβριδοποίηση νουκλεικών οξέωνΥβριδοποίηση νουκλεικών οξέων
 Αλυσιδωτή αντίδραση τηςΑλυσιδωτή αντίδραση της
πολυμεράσης (πολυμεράσης (PCR)PCR)

3. Δ. Κελεφιώτης 3
Τα τελευταία 60 χρόνιαΤα τελευταία 60 χρόνια
 Χημεία τουΧημεία του DNADNA
 Μοριακή βιολογίαΜοριακή βιολογία
• Ποια ένζυμα γνωρίζετε που εμπλέκονταιΠοια ένζυμα γνωρίζετε που εμπλέκονται
στις λειτουργίες του γενετικού υλικού;στις λειτουργίες του γενετικού υλικού;
• Ποιες διεργασίες μπορούν να γίνουνΠοιες διεργασίες μπορούν να γίνουν inin
vitro;vitro;
 ++ περιοριστικές ενδονουκλεάσεςπεριοριστικές ενδονουκλεάσες
= ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΜΗΧΑΝΙΚΗ= ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΜΗΧΑΝΙΚΗ

4. Δ. Κελεφιώτης 4
ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΜΗΧΑΝΙΚΗΓΕΝΕΤΙΚΗ ΜΗΧΑΝΙΚΗ
 Θεμελιώδης στόχοιΘεμελιώδης στόχοι
• Κατανόηση της ζωήςΚατανόηση της ζωής
• Βελτίωση της (ανθρώπινης)Βελτίωση της (ανθρώπινης)
ζωήςζωής
 ΙατρικήΙατρική
 ΓεωργίαΓεωργία
 ΚτηνοτροφίαΚτηνοτροφία
 ΤεχνικέςΤεχνικές
• Κατασκευή ανασυνδυασμένουΚατασκευή ανασυνδυασμένου
DNADNA
• ΜετασχηματισμόςΜετασχηματισμός
• Επιλογή – απομόνωσηΕπιλογή – απομόνωση
• Δημιουργία βακτηριακούΔημιουργία βακτηριακού
κλώνουκλώνου

5. Δ. Κελεφιώτης 5
Γονιδιωματική βιβλιοθήκηΓονιδιωματική βιβλιοθήκη
 όλο το γονιδίωμαόλο το γονιδίωμα
. . .. . .
 ΠεριοριστικέςΠεριοριστικές
ενδονουκλεάσεςενδονουκλεάσες
π.χ.π.χ. EcoRIEcoRI
• 5’-G A A T T C5’-G A A T T C-3’-3’
• 3’-C T T A A G-5’3’-C T T A A G-5’

6. Δ. Κελεφιώτης 6
ΆσκησηΆσκηση
Δίνεται η αλληλουχίαΔίνεται η αλληλουχία
5’-105’-1033
βάσεις-βάσεις-ATGATG CGACGA ATTATT CACCAC CAGCAG AGAAGA CCACCA-10-1044
βάσεις-βάσεις-3’3’
1.1. Βρείτε τη συμπληρωματική της ώστεΒρείτε τη συμπληρωματική της ώστε
να προκύψει δίκλωνονα προκύψει δίκλωνο DNADNA
2.2. Τι θα προκύψει μετά την επώαση μεΤι θα προκύψει μετά την επώαση με
ΕΕcoRIcoRI;;

7. Δ. Κελεφιώτης 7
ΜετασχηματισμόςΜετασχηματισμός
 ΑπομόνωσηΑπομόνωση
 ΚόψιμοΚόψιμο
 ΡάψιμοΡάψιμο
 ΜεταφοράΜεταφορά
 ΚαλλιέργειαΚαλλιέργεια
 ΚλώνοςΚλώνος

8. Δ. Κελεφιώτης 8
Προς το μέλλονΠρος το μέλλον
 ΈναΈνα εργαστήριοεργαστήριο γενετικής μηχανικήςγενετικής μηχανικής
 Βιβλιοθήκη μεΒιβλιοθήκη με E. coliE. coli BACBAC
 Βιβλιοθήκη λάμδαΒιβλιοθήκη λάμδα φάγωνφάγων