Este documento presenta un protocolo para identificar cuerpos cetónicos (ácidos acetoacético, acetona y ácido β-hidroxibutírico) en orina mediante pruebas cualitativas. Los estudiantes aprenderán a determinar acetona usando nitroprusiato de sodio y amoniaco, ácido acetoacético usando cloruro férrico, y ácido β-hidroxibutírico calentando la orina y usando peróxido de hidrógeno y la prueba de Imbert. El objet

1. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIAS
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA Nº
IDENTIFICACIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS EN ORINA
OBJETIVOS
1. Determinar la presencia de cuerpos cetónicos en orina, mediante pruebas cualitativas para cada
uno de ellos.
2. Familiarizarse con algunos protocolos empleados en laboratorios clínicos para el
reconocimiento de cuerpos cetónicos
TEORÍA RELACIONADA.
Los cuerpos cetónicos son los ácidos acetoacético, la acetona y el ácido - hidróxibutirico. En la
cetósis, hallamos un aumento de estas sustancias en la sangre y en la orina. Bajo buenas condiciones de
salud, los cuerpos cetónicos se forman en el hígado y son completamente metabolizados, de tal manera
que solo cantidades insignificantes aparecen en la orina. Por el contrario, en casos de diabetes,
inanición, vómitos con deshidratación y después de la exposición al frío y/o ejercicio vigoroso, los
cuerpos cetónicos pueden encontrarse en cantidades apreciables en la orina, lo cual permite su
determinación cualitativa.
La determinación de acetona (Método de Imbert), se fundamenta en la formación de un
ferropentacianuro con el derivado isonitrado de la acetona, la determinación de acido acetoacético
(Método de Gerhrdt), se basa en la aparición de una coloración rojo-vinosa con el cloruro férrico y en
el Método de Hart, el acido - hidróxibutirico es transformado en acetona, la cual se identifica
mediante el reactivo de Imbert.
MATERIALES Y REACTIVOS
2 tubos de ensayo Amoniaco
1 pinza para crisol Cloruro férrico al 10%
1 gradilla Agua destilada
2 pipetas Peróxido de hidrogeno al 10%
1 pinza para tubos de ensayo Nitroprusiato de sodio al 5% en CH3COOH al 50%

2. 1 beacker de 250ml Orina de diabético (traer)
1 capsula de porcelana Acido acético glacial.
PROCEDIMIENTO
DETERMINACIÓN DE ACETONA:
A 5 ml de orina, agregue 0.5ml de nitroprusiato de sodio disuelto al 5% en acido acético al 50%,
adicione 0.5ml de amoniaco por las paredes del tubo, la aparición de un anillo rojo violáceo en l
contacto de los líquidos, es indicativo de la presencia de acetona.
DETERMINACION DE ACIDO ACETOACÈTICO.
A 5 ml de orina de adicionan unas gotas de cloruro férrico, en presencia de acido acetoacético se
produce una coloración rojo-vinosa.
DETERMINACION DE ACIDO β-HIDROXIBUTIRICO
En una capsula de porcelana se mezclan 10ml de agua y 10 ml de orina, se acidifica con unas 5 gotas
de acido acético y se calienta en una estufa hasta reducir el volumen a la mitad. Con este calentamiento
se eliminan la acetona y el acido acetoacético, al contenido de la capsula se le agregan 10ml de agua y
se transfiere en partes iguales a dos tubos de ensayo, uno de estos tubos servirá como control, al otro se
le adiciona 1ml de peróxido de hidrogeno al 10% y se calienta en baño de María por 5 min, se deja
enfriar y finalmente se practica la prueba de Imbert a ambos tubos.
PREGUNTAS DE ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA
1. Qué otro tipo de sustancias pueden determinarse en la orina por un metabolismo anormal de lípidos.
2. Qué es la cetósis y la Cetonuria.
BIBLIOGRAFIA:
PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. Mexico. MaGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
CONN, E y Stumpf, P.K. Bioquímica F.

3. LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica. Facultad de ciencias.
Universidad Nacional de Colombia sede Bogotá.