curso basico de CG_FAEPI.pptx

Curso Básico de
Cromatografia Gasosa
João Mário Silva
Técnico / Químico
CRQ14100603/14ª Região
Janeiro/2023

DEFINIÇÃO
 Conjunto de técnicas de separação cujo
princípio depende da distribuição
diferenciada dos componentes de uma
mistura entre duas fases, uma
considerada estacionária, e a outra,
móvel.
KROMA +
(COR)
GRAPH
(ESCREVER)

DEFINIÇÃO
 Diferenças nas propriedades das fases móvel e
estacionária possibilitam com que os componentes da
amostra se desloquem através do material cromatográfico
com velocidades desiguais, gerando a separação

ANÁLISE CROMATOGRÁFICA
 AFINIDADE  SEPARAÇÃO

PRINCIPAIS FATOS HISTÓRICOS
1897-1903
David
Talbot Day
Separação
de HC do
petróleo
Separação de pigmentos;
proposição do termo
cromatografia
Mikhail Tswett
1903-1906
1930
Kuhn e Lederer
Cromatografia
em coluna
Cromatografia em
papel
Izmailov e Shraiber
1938
1941
Martin e Synge
Particição em
cromatografia
líquida;
Princípios de
fase gasosa
Primeira publicação
em fase gasosa
Martin e Synge
1952
1958
Egon Stahl
Cromatografia em
camada delgada

LÍQUIDA
CROMATOGRAFIA
PLANAR COLUNA
LÍQUIDA GÁS FLUÍDO
SUPERCRÍTICO
Líquida (CP)
Sólida (CCD)
Ligada (CCD)
Ligada (CSFL)
Sólido (CSS)
Líquida (CGL)
Sólida (CGS)
Ligada (CGFL) Líquida (CLL)
Sólida (CLS, CE)
Ligada (CFLF, CTI e CB)

TIPOS DE CROMATOGRAFIA
SIGLA NOME TIPO DE SEPARAÇÃO
CP Papel Partilha
CCD Camada Delgada Partilha
CCD-FL Camada Delgada com Fase Quimicamente
Ligada
Partilha e Adsorção
CGL Gás-Líquido Distribuição
CGS Gás-Sólido Adsorção
CGFL Gasosa com Fase Quimicamente Ligada Adsorção
CSS Sólida com Fase Móvel Super-crítica Adsorção
CSFL CSS com Fase Quimicamente Ligada Adsorção
CLL Líquido-Líquido Partilha
CLS Líquido-Sólido Adsorção
CE Exclusão Permeação
CLFL LíquidacomFaseQuimicamente Ligada Partilha e Adsorção
CTI Troca Iônica Interações Polares
CB Bioafinidade Bioatividade

TIPOS DE SEPARAÇÃO
 Os princípios físico-químico básicos de separação
são:
 Adsorção: O soluto é retido pela superfície da fase
estacionária através de interações químicas ou físicas.
 Partição: O soluto se dissolve na parte líquida que envolve
a superfície do suporte sólido.
 Troca iônica: O íon da amostra se liga à carga fixa
(grupo funcional) da fase estacionária.
 Exclusão moléculas: As moléculas são separadas
por tamanho, havendo retenção das maiores.
 Bioafinidade: Ocorre uma ligação molecular específica e
reversível entre o soluto e o ligante fixado à fase
estacionária.

 Separação em colunas
convencionais
 Considere a aplicação de
uma mistura de compostos
orgânicos no topo de uma
coluna cromatográfica

 Separação em
colunas
convencionais
 Estabelecida a percolação da FE
com o eluente (FM), os
componentes da mistura passarão
a migrar com velocidades desiguais
caso o sistema seja adequado para
a separação

 Separação em colunas
convencionais
 Uma boa seletividade
cromatográfica garantirá uma
boa separação entre os
componentes da amostra

 Separação em
colunas
convencionais
 Cada componente da amostra
poderá ser coletado isoladamente,
através de um coletor de frações
(neste caso, um simples frasco
coletor)

 Separação em coluna
 O monitoramento do eluato da coluna pode ser feito
através de um detector, cujo sinal identifica a “saída”
de cada componente da mistura, isoladamente

 Separação em
coluna
 A resposta do detector é
traduzida em um gráfico, ou
CROMATOGRAMA, que
relaciona o seu sinal com o
tempo necessário para a
eluição de cada
componente.

 Separação em coluna
 As moléculas de cada componente também migram
com velocidades desiguais devido a fenômenos de
difusão e transferência de massa

 Eluição típica em cromatografia líquida

DEFINIÇÃO DE TERMOS
 Tempo de retenção

 O tempo gasto desde o ato
de injeção até a saída do
ponto máximo do pico do
sistema
O tempo de retenção
engloba todo o tempo que o
componente em questão fica
no sistema cromatográfico,
quer na fase móvel quer na
fase estacionária

 Tempo de retenção
corrigido
Quando as moléculas do soluto
ficam na fase móvel, elas
devem movimentar-se com a
mesma velocidade das
moléculas da própria fase
móvel.
Parte do tempo em que as
moléculas do soluto estão na
fase móvel é igual ao tempo
gasto para as moléculas da fase
móvel percorrerem a coluna, tm
SENDO ASSIM, PARTE DO
TEMPO EM QUE AS
MOLÉCULAS DO SOLUTO
FICAM RETIDAS NA FASE
ESTACIONÁRIA É CALCULADA
PELA DIFERENÇA




 Seletividade
 Para a cromatografia
em coluna, o fator de
separação
(SELETIVIDADE) é
calculado pela razão
entre os respectivos
fatores de retenção
que, por sua vez, são
relacionados aos
tempos de retenção
corrigidos

 Seletividade

 Capacidade

MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS
 TEORIAS
 Martin e Synge – Biochem. J. 35, 1358 (1941)
 Meio descontínuo análogo às colunas de destilação
fracionada, constituído por um grande número de
estágios de equilíbrio ou PRATOS TEÓRICOS (TEORIA
DOS PRATOS TEÓRICOS)
 Van Deemerter, Zuiderweg e Klinkenberg – Chem.
Eng. Sci. 5, 271 (1956)
 Meio contínuo através do qual a separação ocorre por
fenômenos de difusão e transporte de massa (TEORIA
DA VELOCIDADE)

TEORIA DOS PRATOS
TEÓRICOS
 Número de pratos teóricos
 Coluna cromatográfica definida como uma série de estágios
independentes onde acontece um quase-equilíbrio entre o
analito dissolvido na fase estacionária (FE) e o gás de
arraste

TEORIA DOS PRATOS
TEÓRICOS
 O coeficiente Kc determina a distribuição da amostra (A)
entre as fases móvel (M) e estacionária (S) em um
determinado estágio do equilíbrio, obviamente hipotético.
 Quanto mais efetiva for a presença de A na fase móvel (M)
menor será o seu tempo de retenção

TEORIA DOS PRATOS
TEÓRICOS

TEORIA DOS PRATOS
TEÓRICOS
 Cálculo do número de pratos teóricos

TEORIA DOS PRATOS
TEÓRICOS
 Altura equivalente à um prato teórico

RESOLUÇÃO
CROMATOGRÁFICA
 Equação geral

RESOLUÇÃO
CROMATOGRÁFICA
 Otimização de Separações

DETECTORES
 Definições Gerais
 Dispositivos que geram um sinal elétrico
proporcional à quantidade eluída de um analito
 ~60 detectores já usados em CG
~15 equipam cromatógrafos comerciais
4 respondem pela maior parte das aplicações
 Detector por Condutividade Térmica DCT
 Detector por Ionização em Chama DIC
 Detector por Captura de Elétrons DCE
 Detector Espectrométrico de Massas EM

DETECTORES
 Parâmetros Básicos de Desempenho
 Quantidade Mínima Detectável
 Massa de um analito que gera um pico com
altura igual a três vezes o nível de ruído

DETECTORES
 Limite de Detecção
 Quantidade de analito que gera um pico com
S/N=3 e wb=1 unidade de tempo

DETECTORES
 Velocidade de Resposta
 Tempo decorrido entre a entrada do analito
na cela do detector e a geração do sinal
elétrico

DETECTORES
 Sensibilidade
 Relação entre o incremento de área do pico e o
incremento de massa do analito.

DETECTORES
 Faixa Linear Dinâmica
 Intervalo de massas dentro do qual a
resposta do detector é linear

DETECTORES
 CLASSIFICAÇÃO

DETECTORES
 DETECTOR POR CONDUTIVIDADE
TÉRMICA
 Princípio: Variação na condutividade
térmica do gás quando da eluição de um
analito

DETECTORES
 DETECTOR POR
CONDUTIVIDADE TÉRMICA
SELETIVIDADE
SENSIBILIDADE/ LINEARIDADE
VAZÃO DO GÁS DE
ARRASTE

DETECTORES
TÉRMICA
 Configuração tradicional do DCT: bloco metálico com quatro
celas interligadas em par – por duas passa o efluente da
coluna e por duas, o gás de arraste puro

DETECTORES
TÉRMICA
 Quando da eluição de um composto com condutividade
térmica menor que a do gás de arraste puro:

DETECTORES
TÉRMICA
 Os filamentos do DCT são montados numa ponte de
Wheatstone que transforma a diferença de resistência quando
da eluição de amostra numa diferença de voltagem:

DETECTORES
 CARACTERÍSTICAS OPERACIONAIS DO DCT
 SELETIVIDADE: Observa-se sinal para qualquer
substância eluída diferente do gás de arraste =
UNIVERSAL
 SENSIBILIDADE/LINEARIDADE: Dependendo da
configuração particular e do analito: QMD=0,4 ng a 1
ng com linearidade de 104 (ng = dezenas de g)
 VAZÃO DO GÁS DE ARRASTE: O sinal é proporcional à
concentração do analito no gás de arraste que passa
pela cela de amostra

DETECTORES
 Características
Operacionais do DCT
 Natureza do Gás de
Arraste: Quanto maior a
diferença de Δ entre a
condutividade térmica do
gás de arraste puro, A, e
do analito X, MAIOR A
RESPOSTA.
Δ = A - X
Como  ≈ 1/M
(M=massa molecular)
QUANTO MENOR A MASSA
MOLECULAR DO GÁS DE
ARRASTE, MAIOR A
RESPOSTA

DETECTORES
 Características
Operacionais do DCT
 FATORES DE RESPOSTA:
Quanto menor a
condutividade térmica do
analito, maior o sinal
 Os fatores de resposta
dependem da
condutividade térmica
do analito
 Quantidades iguais
de substâncias
diferentes geram
picos
cromatográficos com
áreas diferentes!!!

DETECTORES
 Características Operacionais do DCT
TEMPERATURAS DE OPERAÇÃO: Quanto
maior a diferença entre a temperatura dos
filamentos e do bloco metálico maior a
resposta.

DETECTORES
 APLICAÇÕES
 Separação e
quantificação de
compostos que não
geram sinal em outros
detectores (gases
nobres, gases fixos)
 Por ser um detector
NÃO-DESTRUTIVO, pode
ser usado em CG
preparativa ou detecção
seqüencial com dois
detectores em “tandem”.

DETECTORES
CONDUTIVIDADE TÉRMICA DE ALGUNS GASES

DETECTORES
 DETECTOR POR IONIZAÇÃO EM
CHAMA
PRINCÍPIO: Formação de íons quando um
composto é queimado em uma chama de
hidrogênio e oxigênio.

DETECTORES
 DETECTOR POR IONIZAÇÃO EM
CHAMA

DETECTORES
 DETECTOR POR IONIZAÇÃO EM CHAMA
 Região de quebra: Mistura dos gases, pré-
aquecimento, início da quebra das moléculas de
H2, O2 e outros analitos
 Zona de reação: Reações exotérmicas com
produção e/ou consumo de radicais H, O, OH, HO2
(provenientes do H2), CH e C2 (proveniente do
analito) e íons CHO+ (analito)
 Zona de incandescência: Emissão de luz por
decaimento de espécies excitadas: OH (luz UV), CH
e C2 (visível)

DETECTORES
 Características
Operacionais do DIC
 SELETIVIDADE: Seletivo
para substâncias que
contém ligações C-H em
sua estrutura química
 Como virtualmente todas as
substâncias analisáveis por CG
são orgânicas, na PRÁTICA o
DIC é UNIVERSAL)

DETECTORES
 Características Operacionais do DIC
 SENSIBILIDADE/LINEARIDADE: QMD típicas = 10
pg a 100 pg com linearidade entre 107 e 108 (pg a
mg)
 VAZÕES DE GASES: Além do gás de arraste, as
vazões de alimentação de ar (comburente) e
hidrogênio (combustível) devem ser otimizadas.

DETECTORES
TEMPERATURA DE OPERAÇÃO: O efeito
da temperatura sobre o sinal do DIC é
negligenciável.
TRATAMENTO DO SINAL: Por causa da
baixa magnitude da corrente elétrica
gerada (pA a nA), ela deve ser amplificada
para poder ser registrada.

DETECTORES
 FATORES DE RESPOSTA: O fator de resposta de um
determinado composto é aproximadamente proporcional ao
número de átomos de carbono. Presença de
heteroelementos diminui o fator de resposta.

DETECTORES
 DETECTOR DE NITROGÊNIO-
FÓSFORO
Modificação do DIC altamente seletiva
para compostos orgânicos nitrogenados e
fosforados

DETECTORES
 DETECTORES POR CAPTURA DE
ELÉTRONS
 PRINCÍPIO: Supressão de um fluxo de elétrons lentos
(termais) causada pela sua absorção por espécies
eletrofílicas

DETECTORES
 DETECTOR POR CAPTURA DE
ELÉTRONS
MECANISMO DE CAPTURA DE ELÉTRONS

DETECTORES
 Características Operacionais do DCE
FONTE RADIOATIVA: O ânodo deve estar
dopado com um isótopo radioativo β ou α
emissor

DETECTORES
 Polarização dos eletrodos: Vários modos de polarização
possíveis
 VOLTAGEM CONSTANTE: Pouco usada modernamente 
picos cromatográficos podem ser deformados
 VOLTAGEM PULSADA: Menos anomalias elétricas 
maior sensibilidade e linearidade
 Temperatura do detector: Dependência do sinal com
temperatura de operação bastante significativa
 Variação de ± 3 ºC na temperatura  Erro ~10% na área dos
picos
 Magnitude e sinal do erro depende do composto analisado!
 TEMPERATURA DO DCE DEVE SER RIGOROSAMENTE
CONTROLADA

DETECTORES
GÁS DE ARRASTE: Funcionamento do
DCE é muito dependente da natureza do
gás de arraste

DETECTORES
SENSIBILIDADE/LINEARIDADE:
 QMD=0,01 pg a 1 pg (organoclorados),
linearidade ~104 (pg a ng)

DETECTORES
SELETIVIDADE/FATORES DE RESPOSTA
 Valores de S maximizados para compostos eletrofílicos

DETECTORES
 Detector de Captura
de Elétrons
 APLICAÇÃO

CROMATOGRAFIA GASOSA
 Compostos voláteis de pontos de
ebulição de até 350 ºC e pesos
moleculares menores que 500
 Compostos que possam produzir
derivados voláteis
 Compostos termicamente estáveis na
condições de trabalho

 ALGUMAS
APLICAÇÕES
 Indústria
Petroquímica
 Alimentos e Bebidas
 Biocidas
 Medicamentos
 Meio ambiente

 GÁS DE ARRASTE
 FASE MÓVEL EM CG: NÃO interage com a amostra
– apenas a carrega através da coluna. Assim é
usualmente referida como gás de arraste
 INERTE: Não deve reagir com a amostra, fase
estacionária ou superfícies do instrumento
 PURO: Deve ser isento de impurezas que possam
degradar a fase estacionária

 Impurezas típicas em
gases e seus efeitos:
 H2O, O2 
oxida/hidrolisa algumas
FE, incompatíveis com
DCE
 Hidrocarbonetos 
ruído no sinal de DIC

GASES - FILTROS

 CUSTO: Gases de
altíssima pureza
podem ser muito
caros

 COMPATÍVEL COM UM DETECTOR:
Cada detector demanda um gás de arraste
específico para melhor funcionamento

 Alimentação do gás
de arraste

 Dispositivos de Injeção de Amostra
Os dispositivos para injeção (INJETORES
ou VAPORIZADORES) devem prover meios
de introdução INSTANTÂNEA da amostra
na coluna cromatográfica

 SISTEMAS DE INJEÇÃO

INJETOR “ON-COLUMN” CONVENCIONAL

 Injeção “on-column” de líquidos

 INJETORES SPLIT/SPLITLESS

 SPLIT
 Amostras concentradas onde a diluição com
solvente é impossível particularmente devido a
co-eluição
 SPLITLESS
 Amostras diluídas ou análise de traços
 Análise em ampla faixa de ponto de ebulição
e polaridade
 Adequado para análide de amostras
complexas (multicomponentes)

 Parâmetros de Injeção
 TEMPERATURA DO INJETOR: Deve ser
suficientemente elevada para que a amostra
vaporize-se imediatamente, mas sem
decomposição
  REGRA GERAL: Tinj=50 ºC acima da temperatura
de ebulição do componente menos volátil
 VOLUME INJETADO: Depende do tipo de coluna
e do estado físico da amostra
Sólidos: convencionalmente
se dissolve em um solvente
adequado e injeta-se a
solução

 MICROSSERINGAS PARA INJEÇÃO
 LÍQUIDOS: capacidades típicas  1μL, 5 μL e 10
μL

 COLUNAS
CROMATOGRÁFICAS
Colunas empacotadas

 COLUNAS CROMATOGRÁFICAS
 Coluna Empacotada
 VANTAGENS
 Simples preparação e uso
 Tecnologia clássica
 Grande número de fases líquidas
 Capacidade alta e longa durabilidade
 Usada para análise de gases com DCT
 DESVANTAGENS
 Número de pratos limitado
 Exige controle da vazão da fase móvel
 Análises relativamente demoradas
 Baixa resolução para amostras
complexas

 Temperatura da Coluna
 Além da interação da FE, o tempo que
um analito demora para percorrer a
coluna depende de sua PRESSÃO DE
VAPOR (p0)

 Temperatura da Coluna
 CONTROLE CONFIÁVEL
DA TEMPERATURA DA
COLUNA É ESSENCIAL
PARA OBTER BOA
SEPARAÇÃO EM CG

 FORNO DA COLUNA
 Características desejáveis de um forno:
 Ampla faixa de temperatura de uso: Pelo
menos de Tamb até 400 ºC. Sistemas
criogênicos (T < Tamb) podem ser necessários
em casos especiais
 Temperatura independente dos
demais módulos: Não deve ser
afetado pela temperatura do injetor e
detector
 Temperatura uniforme em seu interior:
Sistemas de ventilação interna muito eficientes
para manter a temperatura homogênea em
todo forno

 FORNO DA COLUNA
 Características desejáveis de um forno:
 Fácil acesso à coluna: A operação de troca de
coluna pode ser freqüente
 Aquecimento e resfriamento rápido: Importante
tanto em análises de rotina e durante o
desenvolvimento de metodologias analíticas
novas
 Temperatura estável e reprodutível:A
temperatura deve ser mantida com precisão e
exatidão de ± 0,1 ºC
EM CROMATÓGRAFOS MODERNOS (DEPOIS DE 1980)
O CONTROLE DE TEMPERATURA DO FORNO É
TOTALMENTE OPERADO POR
MICROCOMPUTADORES

 Programação Linear de Temperatura
Misturas complexas (constituintes com
volatilidades muito diferentes) separadas
ISOTERMICAMENTE:

A temperatura do forno pode ser variada
linearmente durante a separação:

POSSÍVEIS PROBLEMAS
ASSOCIADOS À PLT

 DETECTORES: Dispositivos que
examinam continuamente o material eluído,
gerando sinal quando da passagem de
substâncias que não o gás de arraste

 DETECTORES MAIS IMPORTANTES:
 Detector por condutividade térmica (DCT ou TCD):
Variação da condutividade térmica do gás de
arraste
 Detector por Ionização de Chama (DIC ou FID):
Íons gerados durante a queima dos eluatos em
uma chama de H2 + ar
 Detector por Captura de Elétrons (DCE ou ECD):
Supressão de corrente causada pela absorção de
elétrons por eluatos altamente eletrofílicos

 FASES ESTACIONÁRIAS

 Características de uma FE ideal
SELETIVA: Deve interagir diferencialmente
com os componentes da amostra
REGRA GERAL: A FE deve ter
características tanto quanto
possível próximas das dos
solutos a serem separados
(polar, apolar, aromático...)

 Características de uma FE ideal
 AMPLA FAIXA DE TEMPERATURAS DE USO:
Maior flexibilidade na otimização da separação
 BOA ESTABILIDADE QUÍMICAE TÉRMICA: Maior
durabilidade da coluna, não reage com
componentes da amostra
 POUCA VISCOSIDADE: Colunas mais eficientes
(menor resistência à transferência do analito entre
fases)
 DISPONÍVEL EM ELEVA
DO GRAU DE PUREZA:
Colunas reprodutíveis; ausência de picos
“fantasma” nos cromatogramas

 FASES ESTACIONÁRIAS SÓLIDAS:
ADSORÇÃO
 O fenômeno físico-químico responsável pela
interação do analito + FE sólida é a ADSORÇÃO
A adsorção ocorre na interface entre o gás de arraste e a FE sólida

 FASES ESTACIONÁRIAS SÓLIDAS:
ADSORÇÃO

 FASES ESTACIONÁRIAS SÓLIDAS
Características Gerais:
 Sólidos finamente granulados (diâmetros de
partículas típicos de 105 m a 420 m)
 Grandes áreas superficiais (até 102 m2/g)

 FASES ESTACIONÁRIAS LÍQUIDAS:
ABSORÇÃO
 O fenômeno físico-químico responsável pela
interação do analito + FE sólida é a ABSORÇÃO
A ABSORÇÃO OCORRE NO INTERIOR DO FILME DE FE LÍQUIDA
(FENÔMENO INTRAFACIAL)

 FASES ESTACIONÁRIAS LÍQUIDAS:
ABSORÇÃO

FAMÍLIAS DE FE LÍQUIDAS

QUIRAIS

 COLUNAS EMPACOTADAS
 Tubo de material inerte recheado com FE sólida
granulada ou FE líquida depositada sobre um
suporte sólido

 COLUNAS EMPACOTADAS
FE Líquidas: SUPORTE

 COLUNAS CAPILARES

 COLUNAS CAPILARES
DIÂMETRO INTERNO

ANÁLISE QUANTITATIVA
Duas metodologias:
 Métodos por normalização
 Métodos absolutos
MÉTODOS POR NORMALIZAÇÃO
*Assume-se que todos os componentes da amostra eluem da coluna
e são detectáveis
Existem dois procedimentos:
 Normalização de área (% em área)
 Normalização utilizando-se a área corrigida

 ANÁLISE QUANTITATIVA
Métodos por normalização
Normalização de área (% em área)
Ai = área do composto i
ΣAi = somatória das áreas de todos componentes
Considera-se que todos os componente apresentam
resposta proporcional à sua concentração e que mesma
concentração de diferentes compostos resulte em áreas
iguais (o que dificilmente ocorre).

 Normalização com área corrigida
onde Fi= Ci/Ai do componente i na mistura padrão
Ai = área do composto i
Fi = fator de resposta do componente i
ΣAiFi = somatória das áreas de todos componentes multiplicadas
pelos respectivos fatores de resposta
É necessário conhecer todos os componentes da amostra para
determinação dos fatores de resposta de cada componente

 Métodos absolutos
Utiliza-se métodos absolutos quando:
 O objetivo da análise é quantificar um ou alguns dos componentes da
amostra.
 Ao utilizar detectores específicos ou seletivos que detectam somente os
componentes de interesse
 Existência de compostos na amostra que não são eluídos nas condições
de análise ou não são detectados e que não haja interesse de quantificá-
los.
 Quantificação de componentes em baixa concentração.
 Existem dois procedimentos:
Padronização externa
Padronização interna

Métodos absolutos - Padronização externa
1. Determina-se a curva de calibração de cada componente através da
análise de misturas padrões injetando-se um determinado volume;
2. Posteriormente, injeta-se o mesmo volume da amostra e obtém-se a
concentração do analito através da curva de calibração.
Nesta técnica, se o volume injetado não for exatamente o mesmo ou se houver
alteração de algum parâmetro que afete a resposta do componente no detector,
como por exemplo, variação da intensidade de luz do UV-VIS ou alteração na FM, as
áreas dos picos poderão ser maiores ou menores daquelas obtidas na calibração e
consequentemente os resultados serão incorretos.

 Métodos absolutos - Padronização interna
Para minimizar os problemas da padronização externa, a amostra e a
mistura padrão são modificadas pela adição de um composto
considerado como padrão interno. O padrão interno deve ter as
seguintes características:
1. Não estar presente na amostra original, ser estável e não reativa.
2. Pico separado dos componentes da amostra
3. Eluir próximo dos componentes de interesse
4. Detecção semelhante dos picos de interesse
5. Concentração que produza área similar aos picos analisados
6. Pureza elevada ou conhecida (possíveis impurezas não devem eluir
com os picos de interesse).

 Métodos absolutos - Padronização interna
1. Determina-se a curva de calibração de cada componente através da análise de
misturas padrões contendo o padrão interno. Nessa curva de calibração utiliza-se a
relação entre área do componente i e área do padrão interno em função das relações
de suas concentrações.
2. Posteriormente, injeta-se a amostra contendo padrão interno (preferencialmente na
mesma concentração utilizada na calibração) e obtem-se a concentração do analito
através da curva de calibração.
Se o volume de amostra injetado for diferente do utilizado na calibração, ou se algum
parâmetro analítico for alterado resultando em áreas diferentes daquelas esperadas nas
condições de calibração, a relação de área entre analito e padrão interno não será
afetada.
Calculo da concentração via Padrão Interno:
Conc.% = area analito x FR x massa P.I(g) x100
area do P.I massa Amt (g)

Produto Nível 1 Nível 2 Nível 3
Etilbenzeno 5,3% 20,3% 40,1%
Estireno 95,1% 80,1% 60,2%
Amilbenzeno 21,3% 21,3% 21,3%

min
5 10 15 20 25 30 35 40 45
pA
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
FID1 A, (REC-STDREC00130.D)
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0
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Obrigado
pela
Atenção

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