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IMPLEMENTACION IN VITRO DE UN MODELO DE REGENERACIÓN TISULAR
                     BASADO EN CÉLULAS STEM DENTALES HUMANAS
       D. GUTIERREZ-RIVEROS, R. GARZON-ALARCON, P. AMAYA, K. CORDOBA-PEREZ, J. GUTIERREZ-QUINTERO, S. ROMERO,
                                     N. GUTIERREZ-COLLAZOS J.C MUNEVAR-NINO.
          Unidad de Investigación Básica Oral U.I.B.O. Facultad Odontología. Universidad El Bosque. Bogotá. Colombia
                       danyguti90@gmail.com, rgarzonal@gmail.com, stephiromero@hotmail.com, kathecordoba99@hotmail.com, nicolegutierrez@hotmail.com,
                                                   juan.gutierrex.quintero@gmail.com, munevarjuan@unbosque.edu.co




                                                                                                               REGENERACIÓN TISULAR
                                                        IN VITRO                                                                                                                                                          IN VIVO

        HOMING                          CULTIVO ORGANOTIPICO                                                                                                     ANIMALES DE
                                                                                                         CULTIVO CELULAR                                                                                                          ENSAYOS CLINICOS
                                                                                                                                                               EXPERIMENTACIÓN




Implantación in vivo de scaf-                                                                           Unidad formadora de                                                                                     Injerto de células stem in vivo en una matriz
                                                         Germen dental in vitro
fold de molar mandibular hu-                                                                            colonias DPSCs in vi-                         Experimento de los herma-                                 mineral en la mandibula.Jose J. Mendonca y
                                                         a los 5 días de cultivo
mano en el dorso de una rata.
                                                         organotípico. Ikeda. E
                                                                                                        tro. Munevar y                                nos Vacanti en rato-                                      col/ 2010 Plastic and reconstructive surgery
Mao y col/2010 J Dent Res                                                                               col/2009. IADR                                nes/1995.
                                                         y col/2009. PNAS.


               INTRODUCCION                                       DISEÑO EXPERIMENTAL CÉLULAS STEM
En tiempos recientes se ha podido identificar Este es un estudio experimental in vitro .
células stem en el cuerpo que han sido blan-
                                                                               Muestra DPSCs criopreservadas
co de estudio e investigación, dentro de este
grupo se encuentran las células stem de pul-            Evaluación in vitro
pa dental (DPSC), un grupo de células multi-
potenciales que pueden dar origen a tejido                                             Protocolo de descongelamiento.                                                                                       

                                                  Diferenciación      Adhesión             Cabina de flujo laminar.
dental, periodontal y óseo; las cuales pueden                                                                                                                                                                        




unirse y formar un tejido funcional.
                                                            Proliferación
Para que haya diferenciación de DPSC in vitro
                                                                                       Obtención de suspensión celular.
deben ser introducidas en matrices especiali-
                                                                                         (Materiales/reactivos/equipos)
zadas o scaffolds, que permiten la adhesión
celular, migración y localización, en el institu-   · Histológico
to    UIBO se espera crear las condiciones          · Cultivo celular              Scaffold                    Tiempo
exactas para que exista una relación adecua-        · Citometría de flujo
da entre las matrices y las células stem, y ha-     · Histomorfometría
cer que estas proliferen formando a su vez          · Inmunohistoquímico          Slice tooth       24 hrs          1 mes
un órgano dental funcional in vitro para en         · PCR (biología molecular)    (Nör JE)
                                                                                                             1 semana
un futuro utilizarlas en pacientes.

             OBJETIVO GENERAL                                                                                                      Análisis estadístico                                         Medios de cultivo
Implementación de un modelo de regenera-                                                                                                                                                         NH Expansion
ción tisular in vitro con células stem dentales                                                                                                                                                     Medium
                                                                                                                    Descriptivo                            Analítico (U
humanas en matrices biológicas y sintéticas.                                                                        (ANOVA)                                Man Whitney)
          OBJETIVOS ESPECÍFICOS
1-Evaluar histológicamente la colonización de
las matrices por parte de las células stem
dentales.
2-Analizar la cinética de proliferación celular
al interior de las matrices biológicas y sintéti-
cas.
3-Determinar el fenotipo de las células stem
al interior de las matrices biológicas y sintéti-
cas.




                                                               Etapas del modelo de rege-
                                                               neración tisular in vivo pu-
                                                               blicada por V.T Sakai y col.
                                                                                                                    Modelo in vitro de injuria quirúrgica
                                                               En el 2011 publicado en Ad-                           (Incisión con hoja de bisturí en la
                                                               vances in Dental Research.                                          matriz)
BIBLOGRAFIA
1. Barry FP, Murphy JM. Mesenchymal stem cells: clinical applications and biological characterization. Int J Biochem Cell Biol. 2004 Apr;36(4):568-84.
2. Bartold PM, Shi S, Gronthos S. Stem cells and periodontal regeneration. Periodontol 2000. 2006; 40:164-72.
3.Chamberlain G, Fox J, Ashton B, Middleton J.Concise review: mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing. Stem Cells. 2007 Nov;25(11):2739-49. Epub 2007 Jul 26.
4. Dominici M, Le Blanc K, Mueller I, Slaper-Cortenbach I, Marini F, Krause D, Deans R, Keating A, Prockop Dj, Horwitz E.Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells.The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 2006;8(4):315-7.
5. Graziano A, d'Aquino R, Cusella-De Angelis MG, Laino G, Piattelli A, Pacifici M, De Rosa A,Papaccio G.Concave pit-containing scaffold surfaces improve stem cell-derived osteoblast performance and lead to significant bone tissue formation. PLoS One. 2007 Jun 6;2(6):e496.
6. Gronthos S, Mankani M, Brahim J, Robey PG, Shi S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 2000 Dec 5;97(25):13625-30.
7. Gronthos S, Brahim J, Li W, Fisher LW, Cherman N, Boyde A, DenBesten P, Robey PG, Shi S Stem cell properties of human dental pulp stem cells.J Dent Res. 2002 Aug;81(8):531-5.

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IMPLEMENTACION IN VITRO DE UN MODELO DE REGENERACIÓN TISULAR BASADO EN CÉLULAS STEM DENTALES HUMANAS

  • 1. IMPLEMENTACION IN VITRO DE UN MODELO DE REGENERACIÓN TISULAR BASADO EN CÉLULAS STEM DENTALES HUMANAS D. GUTIERREZ-RIVEROS, R. GARZON-ALARCON, P. AMAYA, K. CORDOBA-PEREZ, J. GUTIERREZ-QUINTERO, S. ROMERO, N. GUTIERREZ-COLLAZOS J.C MUNEVAR-NINO. Unidad de Investigación Básica Oral U.I.B.O. Facultad Odontología. Universidad El Bosque. Bogotá. Colombia danyguti90@gmail.com, rgarzonal@gmail.com, stephiromero@hotmail.com, kathecordoba99@hotmail.com, nicolegutierrez@hotmail.com, juan.gutierrex.quintero@gmail.com, munevarjuan@unbosque.edu.co REGENERACIÓN TISULAR IN VITRO IN VIVO HOMING CULTIVO ORGANOTIPICO ANIMALES DE CULTIVO CELULAR ENSAYOS CLINICOS EXPERIMENTACIÓN Implantación in vivo de scaf- Unidad formadora de Injerto de células stem in vivo en una matriz Germen dental in vitro fold de molar mandibular hu- colonias DPSCs in vi- Experimento de los herma- mineral en la mandibula.Jose J. Mendonca y a los 5 días de cultivo mano en el dorso de una rata. organotípico. Ikeda. E tro. Munevar y nos Vacanti en rato- col/ 2010 Plastic and reconstructive surgery Mao y col/2010 J Dent Res col/2009. IADR nes/1995. y col/2009. PNAS. INTRODUCCION DISEÑO EXPERIMENTAL CÉLULAS STEM En tiempos recientes se ha podido identificar Este es un estudio experimental in vitro . células stem en el cuerpo que han sido blan- Muestra DPSCs criopreservadas co de estudio e investigación, dentro de este grupo se encuentran las células stem de pul- Evaluación in vitro pa dental (DPSC), un grupo de células multi- potenciales que pueden dar origen a tejido Protocolo de descongelamiento.  Diferenciación Adhesión Cabina de flujo laminar. dental, periodontal y óseo; las cuales pueden  unirse y formar un tejido funcional. Proliferación Para que haya diferenciación de DPSC in vitro Obtención de suspensión celular. deben ser introducidas en matrices especiali- (Materiales/reactivos/equipos) zadas o scaffolds, que permiten la adhesión celular, migración y localización, en el institu- · Histológico to UIBO se espera crear las condiciones · Cultivo celular Scaffold Tiempo exactas para que exista una relación adecua- · Citometría de flujo da entre las matrices y las células stem, y ha- · Histomorfometría cer que estas proliferen formando a su vez · Inmunohistoquímico Slice tooth 24 hrs 1 mes un órgano dental funcional in vitro para en · PCR (biología molecular) (Nör JE) 1 semana un futuro utilizarlas en pacientes. OBJETIVO GENERAL Análisis estadístico Medios de cultivo Implementación de un modelo de regenera- NH Expansion ción tisular in vitro con células stem dentales Medium Descriptivo Analítico (U humanas en matrices biológicas y sintéticas. (ANOVA) Man Whitney) OBJETIVOS ESPECÍFICOS 1-Evaluar histológicamente la colonización de las matrices por parte de las células stem dentales. 2-Analizar la cinética de proliferación celular al interior de las matrices biológicas y sintéti- cas. 3-Determinar el fenotipo de las células stem al interior de las matrices biológicas y sintéti- cas. Etapas del modelo de rege- neración tisular in vivo pu- blicada por V.T Sakai y col. Modelo in vitro de injuria quirúrgica En el 2011 publicado en Ad- (Incisión con hoja de bisturí en la vances in Dental Research. matriz) BIBLOGRAFIA 1. Barry FP, Murphy JM. Mesenchymal stem cells: clinical applications and biological characterization. Int J Biochem Cell Biol. 2004 Apr;36(4):568-84. 2. Bartold PM, Shi S, Gronthos S. Stem cells and periodontal regeneration. Periodontol 2000. 2006; 40:164-72. 3.Chamberlain G, Fox J, Ashton B, Middleton J.Concise review: mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing. Stem Cells. 2007 Nov;25(11):2739-49. Epub 2007 Jul 26. 4. Dominici M, Le Blanc K, Mueller I, Slaper-Cortenbach I, Marini F, Krause D, Deans R, Keating A, Prockop Dj, Horwitz E.Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells.The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 2006;8(4):315-7. 5. Graziano A, d'Aquino R, Cusella-De Angelis MG, Laino G, Piattelli A, Pacifici M, De Rosa A,Papaccio G.Concave pit-containing scaffold surfaces improve stem cell-derived osteoblast performance and lead to significant bone tissue formation. PLoS One. 2007 Jun 6;2(6):e496. 6. Gronthos S, Mankani M, Brahim J, Robey PG, Shi S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 2000 Dec 5;97(25):13625-30. 7. Gronthos S, Brahim J, Li W, Fisher LW, Cherman N, Boyde A, DenBesten P, Robey PG, Shi S Stem cell properties of human dental pulp stem cells.J Dent Res. 2002 Aug;81(8):531-5.