Generalidades, Métodos y técnicas

1. DETECCIÓN E
IDENTIFICACIÓN DE
ANTICUERPOS
IRREGULARES
Jessica N. Altamirano
Ruiz
Inmunohematología
Septiembre 2017

2. INTRODUCCIÓN
Existen dos tipos de anticuerpos irregulares: los
aloanticuerpos y los autoanticuerpos. Cuando algún
individuo produce un anticuerpo dirigido contra un
antígeno que no posee, éste se denomina aloanticuerpo.
En cambio, cuando produce un anticuerpo dirigido
contra un antígeno que posee, éste se denomina
autoanticuerpo.
Consecuentemente, por definición, los aloanticuerpos
sólo reaccionan con glóbulos rojos alogénicos que
expresan el antígeno correspondiente, no con los
glóbulos rojos propios.
Contrariamente, los autoanticuerpos reaccionan con los
glóbulos rojos propios. En efecto, los autoanticuerpos
generalmente reaccionan con los glóbulos rojos de la
mayoría de los reactivos así como con los glóbulos rojos
autólogos.
(American Association of Blood Banks, 2005)

3. ANTICUERPOS
IRREGULARES: DEFINICIÓN
Son aquellos anticuerpos formados
en el paciente que carece de cierto
antígeno y es expuesto a este, por
lo que su cuerpo reacciona
formando aglutininas
(aloinmunización) para el antígeno
extraño; y que en una segunda
oportunidad, al entrar en contacto
con el mismo antígeno genera una
respuesta inmunitaria, causando
reacciones Post-transfusionales,

4. ANTICUERPOS
IRREGULARES: GENERALIDADES
•Son principalmente IgG, por lo tanto de
importancia clínica.
• Entre los que se encuentran los Anticuerpos del:
•Sistema Rh: D, C, E, c, e
•Sistema MNSs
•Sistema Duffy (Fya, Fyb)
•Sistema Kidd (Jka, Jkb)
•Sistema Kell (K, c, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb)
•Sistema Lutheran (Lua, Lub)
•Sistema Lewis (Lea, Leb)
•Sistema P (P1)
•Sistema X (Xg)

5. DETECCIÓN DE
ANTICUERPOS IRREGULARES
(TAI)
•Método/Técnica de Screening
en la rutina del Bco. de Sangre.
•Se realiza en simultáneo a la
determinación del grupo
sanguíneo ABO y Rh.
•Además se le adjunta una
prueba autóloga.
•Paneles I y
II.
•Plasma
Paciente.
•Centrifugar.
Salino
•Resuspende
r
•Incubar 45
min.
•Centrifugar.
37°C
•Lavar 4
veces
•Reactivo
Coombs.
•Centrifugar.
Coombs

6. IDENTIFICACIÓN DE
ANTICUERPOS IRREGULARES
•Estudio completo de Anticuerpos Irregulares.
•Se realiza cuando el Screening de Anticuerpos Irregulares da
Positivo en alguno de los tubos.
•Existen Tres técnicas: En Tubo, En Columna de Gel y Microplacas.

7. MATERIALES, TÉCNICAS Y
MÉTODOS
Técnica en Tubo Técnica en Columna Técnica en Microplaca
• Células panel.
• Suero de Coombs
Poliespecífico.
• Células Control
Coombs.
• Espécimen.
 3 Lecturas:
 Salino
 37°C
 Fase Coombs
 Técnica Manual
• Células panel.
• Columnas de
reacción
• Espécimen.
 1 Lectura:
 37°C
 Pueden ser:
 Automatizado
 Semi-
automatizado
 Manual
• Células anti-IgG
• Microplacas
• Espécimen.
 Lectura Final
(previa incubación, lavado y
agitación)
 Pueden ser:
 Automatizado
 Semi-
automatizado
 Manual

8. MATERIALES, TÉCNICAS Y
MÉTODOSCélulas testigos
(Paneles)
•Células completamente
fenotípadas.
•Pueden ser pool, o de un
único donante.
•Permitir identificar los
anticuerpos de mayor
frecuencia y excluir otros.
•Al menos 2 paneles con
expresión homocigota para
Ac que presentan efecto
dosis.
•Poseer al menos un perfil
R1R1 y otro R2R2
Suero Anti-
Inmunoglobulina
Humana (SAGH o
Coombs)
Debe ser poliespecífico, apropiado
para cada tipo de técnica
(incorporado en los sistemas de
aglutinación en columna o en
presentaciones para su utilización
en tubos).
(Aburto, 2014)
“Para poder concluir con la identidad de un anticuerpo,
deberán existir suficientes células positivas y negativas para
cada antígeno, de tal forma que los resultados obtenidos en
un determinado caso sean definitivos y no deducidos al azar o
por casualidad.”(Linares, 2002)

9. Columnas de Gel
(Griffols)
•Fase Continua: SEPHADEX G
Superfino
•Fase Dispersa: LISS/NaCl + SAGH
Columnas de Perlas de
Vidrio
(Jonhsons&Jonhsons)
•Fase Continua: Micro Perlas de
Vidrio
•Fase Dispersa: LISS/NaCl + SAGH
Técnicas de
Columnas
MATERIALES, TÉCNICAS Y
MÉTODOS

10. •Fase sólida pueden contener antígenos o anticuerpos .
•Los glóbulos rojos intactos o las membranas de los mismos,
de fenotipo conocido, son fijados a pocillos de microplacas.
•Se dispensa el suero o plasma del paciente.
•Luego de la incubación, se remueven los anticuerpos que no
se unieron.
•Se utiliza una suspensión de glóbulos rojos testigos
revestidos con anti-IgG. Luego de una breve centrifugación
•Positiva: si las células indicadoras se adhieren en forma
difusa en las paredes del pocillo
•Negativa: si las células testigo se sedimentan en el fondo.
MATERIALES, TÉCNICAS Y
MÉTODOS Técnicas en
Microplacas

11. • Los Micropocillos vienen
impregnados con SAGH
(Poliespecifico) en una
fase continua en el fondo
del pocillo
•Mientras por fase
dispersa tiene LISS.
•Posee un imán en la base
del pocillo.
•Los eritocitos
sensibilizados reaccionan
con el SAGH en el fondo
del pocillo precipitándose
formando un patrón
regular.
•No permite la
observación de
hemolisis.
MATERIALES, TÉCNICAS Y
MÉTODOS Técnicas en
Microplacas
E.M®Technology por Diagast

12. INTERPRETACIÓN DE LOS
RESULTADOS
En tubo: En Columna:
En Microplaca:
(Aburto, 2013)

13. MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN

14. MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN
1. Se eliminan anticuerpos presentes en los paneles
negativos.
2. Uno por uno, en la línea de cada panel positivo:
a) Se eliminan aquellos anticuerpos que nos están presentes en el panel.
b) Finalmente, identificar el o los Anticuerpos Irregulares presentes.

15. TÉCNICAS PARA
ANTICUERPOS IRREGULARES
MÚLTIPLES1. Tratamiento con Enzimas.
2. Variación en la Temperatura de
incubación.
3. Aumento tiempo de incubación.
4. Modificación del pH.
5. Inhibición por antígenos
solubles.
6. Absorción y elución selectiva.
7. Empleo de Compuestos
sulfidrilicos.
8. Uso de células Rh nulo.
(Linares, 2002)

16. TÉCNICAS PARA
ANTICUERPOS IRREGULARES
MÚLTIPLES
Tratamiento con
enzimas
Se le adiciona enzimas a os
glóbulos rojos, propiciar la
reacción de Antígeno-
anticuerpo con el fin de
identificar anticuerpos sin
que estos se vean
interferidos por la
presencias de otros
anticuerpos presentes.
Las enzimas proteolíticas de
preferencia son Bromelina,
Papaína y Ficina.
Existen preparados y células
tratadas comerciales y listo
para su uso.
Antígenos Afectados por el
tratamiento enzimático
Potenciados Atenuados
Rh MNS
P Duffy
Kidd Xg
Lewis Chido/Rodger
s
Para la técnica en
columna utilizar
Columna neutral.

17. TÉCNICAS PARA
ANTICUERPOS IRREGULARES
MÚLTIPLES
Variación de
Temperatura de
incubación.
Principalmente se usa,
cuando existe un
anticuerpo frío (IgM)
fijador del complemento
enmascarando anticuerpos
calientes (IgG) de
significancia clínica.
Absorción de
anticuerpos
Permite extraer un
anticuerpo interferente,
uniéndolo a su antígeno
ubicado en el glóbulo rojo y
dejando al segundo
anticuerpo en el plasma.
Básicamente, se busca
sensibilizar el glóbulo rojo,
y luego por una
centrifugación separar el
plasma de los eritrocitos. Y
así evaluar el otro
anticuerpo que estaba
siendo opacado por el
anticuerpo absorbido.

18. TÉCNICAS PARA
ANTICUERPOS IRREGULARES
MÚLTIPLES
Elución de anticuerpos
La elución busca separar del hematíe, los
anticuerpos unidos a él (sensibilizados), con el fin
de evaluar específicamente y por separado ese
único anticuerpo.
Puede ser por métodos físicos o métodos
químicos.
El proceso de Absorción y elución por lo general,
van juntos; pero la elución puede realizarse
también a pacientes sensibilizados “in vivo”.

19. TÉCNICAS PARA
ANTICUERPOS IRREGULARES
MÚLTIPLES
Método Ventajas Desventajas
Calor (56°C) Rápido
Bueno para EHRN por ABO Pobre para la recuperación
de alo y auto anticuerpos
(IgG)
Congelación Rápido
Bueno para EHRN por ABO
Menos volumen de GR
Digitonina ácida No toxico
Recuperar la mayoría de anticuerpos
Eliminación tedioso del
estroma
Baja sensibilidad para
anti-Kidd
Diclorometano/
Cloruro de
metileno
No carcinogénico, no inflamable
Bueno para Alo y auto anticuerpos (IgG) Vapores Tóxicos
Acida en frío Rapida y fácil.
Hay kits comerciales
Para la mayoría de alo y auto anticuerpos calientes
Posibles falsos positivos
del eluato.
Métodos de obtención del eluato.
Adaptado desde: American Association of Blood Banks. (2005). Technical Manual. Bethesda, Maryland: American
Association of Blood Banks.

20. UTILIDAD CLÍNICA
•En el Banco de Sangre:
– Aclarar discrepancias ABO
– Catalogación de donantes: Manejo del Stock.
– Receptores de Transfusiones: Evitar Reacciones
Transfusionales.
•En la Clínica:
– Estudio de sensibilización en embarazadas: EHRN.
– Estudio de Anemias Hemolíticas Autoinmunes.
– Estudio de las Reacciones Post-transfusionales.

21. CONCLUSIÓN
Entre el 0,3 y 38% de la población presenta
aloanticuerpos; dependiendo del grupo de pacientes o
donantes que se estudie y la sensibilidad de los métodos
utilizados.
La inmunización a los antígenos eritrocitarios puede ser
el resultado de embarazo, transfusiones, trasplantes,
administración de material inmunogénico, etc. En
algunos casos, no se puede identificar el episodio
específico que provocó la inmunización. Los anticuerpos
generados naturalmente presumiblemente son el
resultado de la exposición a antígenos ambientales,
bacterianos o virales similares a los antígenos de grupos
sanguíneos. Asimismo, los anticuerpos detectados en las
pruebas serológicas pueden adquirirse de manera pasiva,
a partir de inyección de inmunoglobulina, transfusión de
plasma, linfocitos pasajeras en trasplante de órganos o
células progenitoras hematopoyéticas.

22. BIBLIOGRAFIA
•American Association of Blood Banks. (2005). Technical
Manual. Bethesda, Maryland: American Association of
Blood Banks.
•Linares, J. (2002). Inmunohematología y tranfusión:
Principios y fundamentos. Caracas, Venezuela.
•Aburto, A. (2014). Recomendaciones para la detección e
identificación de anticuerpos irregulares eritrocitarios.
Santiago, Chile: Instituto de Salud Pública de Chile.
•Aburto, A. (2013). Recomendaciones para la clasificación
sanguínea ABO. Santiago, Chile: Instituto de Salud
Pública de Chile.

23. DETECCIÓN E
IDENTIFICACIÓN DE
ANTICUERPOS
IRREGULARES
Jessica N. Altamirano
Ruiz
Inmunohematología
Septiembre 2017