2. Definición
Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis
químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda,
la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica
relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o
reacciones químicas que se miden en una muestra
3. Componentes y partes de un espectrofotómetro
Fuente de luz : La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las
siguientes condiciones: estabilidad, direccionabilidad, distribución de energía espectral
continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio (también
llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón y lámpara de deuterio que es utilizada en
los laboratorios atómicos.
Monocromador : El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que
inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática.
Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de
dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que lleva el
haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa
todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que
direcciona ese haz hacia la rendija de salida.
4. Compartimiento de Muestra : Es donde tiene lugar la interacción con la materia (debe
producirse donde no haya absorción ni dispersión de las longitudes de onda). Es
importante destacar, que durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su
máxima expresión, con base en sus leyes de absorción, en lo que concierne al paso de la
molécula de fundamental-excitado.
Detector : El detector, es quien detecta una radiación y a su vez lo deja en evidencia,
para posterior estudio. Hay de dos tipos:
a) los que responden a fotones;
b) los que responden al calor.
Fotodetectores : En los instrumentos modernos se encuentra una serie de
16 fotodetectores para percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda,
cubriendo el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes
móviles del equipo.
5. Cómo utilizar un espectrofotómetro
Un espectrofotómetro es un dispositivo utilizado para medir la luz a una longitud
de onda determinada. Está compuesto por dos partes: un espectrómetro y un
fotómetro. El espectrómetro proporciona luz a una longitud de onda específica. El
fotómetro mide la intensidad de la luz. Mediante el cálculo de la cantidad de luz
que una solución es capaz de absorber y la aplicación de la ley de Beer, el
espectrofotómetro puede determinar la concentración de una solución con color.
6. Manejo
1.Encender el espectrofotómetro antes de realizar la prueba teniendo en cuenta el
tiempo de termostatización recomendado por el fabricante.
2. Seleccionar la longitud de onda de trabajo. Si tiene un fotocolorímetro seleccione
el filtro más próximo a la longitud de onda indicada.
3. Seleccionar la temperatura de trabajo.
4. Elegir una cubeta en buen estado (sin deformaciones ni suciedad)
5. Llevar a cero de absorbancia con agua destilada.
6. Vaciar la cubeta y enjuagarla con una pequeña porción de la solución a medir
para evitar arrastre.
7. Cargar la cubeta con la solución y leer la absorbancia por duplicado informando
la absorbencia promedio.
8. Si se debe medir más de una solución, enjuagar la cubeta con una porción de la
solución antes de medir y leer como en el paso 7. Tener la precaución de empezar
siempre por la solución más diluida.
7. calibración
Hay que usar un blanco, y con ese calibrar. Por que si no lo haces obtendrás
lecturas erróneas.
Si la sustancia que estás midiendo está disuelta en algún reactivo químico, ése
reactivo químico será tu blanco.
Por ejemplo si disuelves un polvo (reactivo químico) en metanol, el metanol será
tu blanco. Esto para saber la concentración de dicho polvo, claro una vez que
hayas hecho la curva de concentración.
Aunque generalmente se usa como blanco agua destilada, para conocer la
absorbancia o transmitancia de un líquido.
8. Aplicaciones
Las aplicaciones principales son:
Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún compuesto
utilizando las fórmulas ya mencionadas.
Para la determinación de estructuras moleculares.
La identificación de unidades estructurales específicas ya que estas tienen distintos
tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomerías).
Determinar constantes de disociación de indicadores ácido-base.
