Determinacion de proteinas mediante el metodo de kjeldahl nutricion
Determinación de la vitamina c por espectrofotometría
1. "AÑO DE LA PROMOCIÓN DE LA INDUSTRIA RESPONSABLE Y DEL COMPROMISO CLIMÁTICO"
“DETERMINACIÓN DE LA VITAMINA C POR ESPECTROFOTOMETRÍA”
CURSO: Análisis instrumental de productos Agroind.
CICLO: VI
DOCENTE: ING. RODRIGUEZ PAUCAR GILBERT NILO
INTEGRANTES:
MUÑOZ ROJAS, Andrea Gisela.
VEGA VIERA, Jhonas Abner.
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
NUEVO CHIMBOTE - PERÚ
2. COMPOSICIÓN BIOQUÍMICA DE
PRODUCTOS AGROINDUSTRIALES
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I. INTRODUCCIÓN.
El ácido ascórbico, comúnmente llamado vitamina c, presenta un aspecto de cristales blancos, con sabor acido, sensible a la luz y a ciertos metales pesados, es un tipo de vitamina hidrosoluble y esencial, es sintetizado naturalmente por las plantas superiores y algunos animales, con acepción del seres humanos, y también puede ser sintetizado químicamente a partir de glucosa, mediante una serie de reacciones catalizadas por enzimas, es considerado uno de los más potentes agentes antioxidantes del organismo; en humanos se encuentra concentrado en cierto órganos como: ojos, hígado, vaso, cerebro, glándulas suprarrenales y tiroideas.
El ácido ascórbico o vitamina C no es sintetizable por el organismo, por lo que se debe ingerir desde los alimentos que lo proporcionan como las frutas cítricas, los vegetales verdes, las papas y los chiles.
Es un nutriente esencial, en particular para los mamíferos. La presencia de esta vitamina es requerida para un cierto número de reacciones metabólicas en todos los animales y plantas y es creada internamente por casi todos los organismos, siendo los humanos una notable excepción. Su deficiencia causa escorbuto en humanos, de ahí el nombre de ascórbico que se le da al ácido, y es ampliamente usada como aditivo alimentario para prevenir este último.
El ácido ascórbico tiene características reductoras por sus dos grupos donadores de protones, es termohábil y se en el aire con gran facilidad, interviene en muchas reacciones metabólicas importantes, como por ejemplo, actúa como cofactor en las reacciones de hidroxilación en la síntesis del colágeno. Este es esencial para la formación normal de huesos y dientes y para reforzar paredes capilares. Inhibe inflamación de las encías, anemia, deficiencia en la cicatrización de heridas y susceptibilidad a las infecciones, también es importante en el metabolismo de carbohidratos y en controlar procesos infecciosos, la mayoría de las reacciones metabólicas el ácido ascórbico se deben u fuerte potencial reductor, su actividad antioxidante deriva del desplazamiento de ácido l-ascórbico a su forma oxidada L-dehidroascorbico, esto también habilita la molécula para combatir radicales oxidativos y los radicales acuosos.
Para la determinación de esta vitamina se utiliza un método conocido como el método de Mohr, el cual consiste en un proceso de doble precipitación en donde se presenta la formación de un primer sólido, que es la especie a cuantificar, y alcanzado el punto estequiométrico se forma otro precipitado que corresponde a la especie que señala el punto final de la valoración, este en un método espectrofotométrico, es decir que se basa en la absorción de radiación ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia de lo cual se origina un estado activado que posteriormente elimina su exceso de energía en forma de calor.
II. OBJETIVOS.
Determinación cuantitativa Ácido Ascórbico, por el método de espectrofotométrico.
Aprender a manejar correctamente el espectrofotómetro.
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III. MARCO TEÓRICO.
3.1. Espectrofotometría.
La determinación del ácido ascórbico por el método de espectrofotometría, se basa en la reducción del colorante 2-6 diclorofenolindofenol, por el efecto del ácido ascórbico en solución. El contenido de ácido ascórbico es directamente proporcional a la capacidad de un extracto de muestra para reducir una solución estándar de colorante determinada espectrofotométricamente.
“La espectrofotometría es el conjunto de procedimientos que utilizan la luz para medir concentraciones químicas” (Harris, 2001). Harris (2001) menciona que la luz puede describirse en términos de partículas y ondas; la longitud de onda ë , es la distancia entre las crestas de dos ondas y la frecuencia í, es el número de oscilaciones completas de una onda en un segundo. La Siguiente ecuación describe la relación entre frecuencia y longitud de onda:
c
La mayoría de las sustancias en el visible tienen n>1, lo que significa que la luz visible atraviesa la materia más lento que en el vacío; por lo que es conveniente concebir la luz como fotones (Harris, 2001), cada uno de éstos transporta energía, con lo que se obtiene una relación como la siguiente:
E h
Cuando una molécula absorbe un fotón, su energía aumenta y pasa a un estado excitado; sin embargo cuando emite un fotón, disminuye su energía manteniéndose en su estado fundamental (Harris, 2001).
Las mediciones espectrofotométricas son realizadas por medio de espectrofotómetros, que tiene una serie de componentes para identificar la absorbancia de la muestra a analizar.
Figura. Diagrama esquemático de una medida espectrofotométrica (Harris, 2001).
“La absorbancia es importante porque es directamente proporcional a la concentración de la especie que absorbe la luz de la muestra” (Harris, 2001).
Fuente de luz
Selector de Longitud de onda (Monocromador)
Muestra
Detector de luz
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3.2. Vitamina C.
El contenido de vitamina C en las frutas y verduras varía dependiendo del grano de madurez, menor cuando están verdes aumenta cuando está en su punto de cosecha y luego vuelve a disminuir; por lo que la fruta madura pierde parte de su contenido en vitamina C lo más recomendable es comer las frutas y verduras frescas pues la acción de calor destruye a la vitamina C. también hay q mencionar que la vitamina C en contacto en contacto con el aire se oxida y pierde su actividad. La otra forma de destrucción de la vitamina C es al tener contacto con el alcohol etílico, por ejemplo con la cerveza.
3.3. Estructura de la vitamina C.
La sustancia cristalina pura finalmente aislada de los productos (frutas y verduras) que previenen el escorbuto es el Ácido L-ascórbico.
El Ácido L-ascórbico es una sustancia muy soluble que posee propiedades acidas fuertemente reductoras.
El enantiómero L del ácido ascórbico (ascórbico procede de su capacidad para prevenir y curar el escorbuto), también conocido como vitamina C, es un ácido orgánico y un antioxidante perteneciente al grupo de vitaminas hidrosolubles. No se sintetiza en el organismo, por lo cual tiene que ser aportada en la dieta. Se encuentra, principalmente en verduras y frutas frescas y en los zumos de cítricos. Tales propiedades se deben a su estructura ENODIAL que esta conjugado con el grupo carbonilo de una lactosa.
Se considera que las necesidades diarias de ácido ascórbico para un adulto no exceden de los 60mg y que cantidades superiores a los 3g diarios causan acidificación de la orina e incrementan el consiguiente riesgo de cálculos urinarios.
La deficiencia de vitamina C es poco común pero las personas que no ingieran ninguna o poca cantidad de vitamina C (menos de 10 mg por día) pueden contraer durante varias semanas escorbuto. El escorbuto causa cansancio, inflamación de las encías, pequeñas manchas en la piel de color rojo o violeta, dolor en las articulaciones, mala cicatrización de las heridas, y vello ensortijado o en forma de "sacacorchos". Otros síntomas de esta enfermedad incluyen depresión, inflamación y sangrado de las encías
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Figura. Estructura de una molécula de vitamina C
3.4. Naranja generalidades
La naranja es un hesperidio, que es una variante de la baya. Consta de varios carpelos o gajos fáciles de separar, cada uno de los cuales contiene una pulpa, de color variable entre el anaranjado y el rojo, jugosa y suculenta, varias semillas y numerosas células jugosas cubiertas por un exocarpo coriáceo o cáscara de color anaranjado cuyo interior es blanco, que contiene numerosas glándulas llenas de aceites esenciales. Entre las variedades más comunes se encuentran las naranjas amarga y dulce y el mandarino. La naranja forma parte del género Citrus, de la familia de las Rutáceas (Rutaceae). El naranjo dulce es Citrus sinensis; el amargo, Citrus aurantium, y el mandarino, Citrus reticulata (Kimball, 1991).
3.5. Composición nutricional
Las características nutricionales de la naranja ayudan al fortalecimiento de las defensas del organismo, debido a su contenido de vitaminas C, B1, B2, B3, B5, B6 y E; sales minerales, ácidos orgánicos, pectina, componentes que fortalecen a la circulación y propiedades anticancerígenas en el estómago (Espinal, 2005).
Calorías. Contiene un alto nivel de calorías, la mitad de las calorías son provenientes de la sacarosa y oligosacáridos (Kimball, 1991).
Proteínas. El contenido de nitrógeno se ha reportado que puede ser de 60 a 120 mg por 100 ml de jugo de naranja (Ting, 1967). En general los productos cítricos se consideran bajo en proteínas.
Carbohidratos. Carbohidratos complejos o polisacáridos como la pectina, hemicelulosa, y celulosa ocurre en significantes proporciones en los productos cítricos, en comparación con los carbohidratos mayoritarios como son la sucrosa, los oligosacáridos (Kimball, 1991).
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Sodio y Potasio. Los productos cítricos contienen cantidades insignificantes de sodio. Sin embargo niveles altos de potasio son comunes, van de 200 mg a 2000 mg por porción, y se pueden encontrar estos niveles en productos como jugos comercializados (Harding y Lewis, 1940).
Vitamina C. Contiene niveles altos de ácido ascórbico, es muy estable en productos como jugos y se degrada con el almacenamiento. Los grandes cambios, especialmente en color y sabor, que tienen lugar durante el almacenamiento de las frutas y hortalizas corren paralelos con la disminución progresiva del ácido ascórbico que poseen (Braverman, 1967).
Por ejemplo, el oscurecimiento de los jugos cítricos durante su almacenamiento, se ha visto que se produce después de que todo el ácido ascórbico ha sido irreversiblemente oxidado. Para prevenir la oxidación de la vitamina C al manipular los alimentos, deben observarse algunas precauciones. Debe inactivarse la enzima ascorbinasa, lo que es muy importante en la deshidratación de frutas y hortalizas que suele realizar escaldando. También deberá evitarse el oxígeno tanto como sea posible, y se deberán eliminar vestigios de cobre en el equipo de elaboración del producto final (Braverman, 1967).
3.6. Vitamina c o ácido ascórbico
El ácido ascórbico tiene una estructura de lactosa. La acidez no se debe a un grupo carboxílico, sino a la posibilidad de que se iónice el hidroxilo situado sobre el carbono 3, formando un anión que queda estabilizado por resonancia.
Se sabe que es un compuesto polar con gran masa molecular 140 000, que le impide atravesar la membrana celular por simple difusión (Duran, M.H. 2000).
Las propiedades del ácido ascórbico o vitamina C, que junto a las vitaminas B pertenecen al grupo de hidrosolubles, son variadas y complejas, pues los investigadores informan, desde su descubrimiento en 1936, casi periódicamente sobre nuevas aplicaciones del ácido ascórbico, un alimento funcional, porque más allá de nutrir tienen efectos benéficos para la salud, tales como, su utilidad en la prevención de la formación de cataratas y en el riesgo de desarrollar degeneración macular en personas mayores o ancianas, al servir de coadyuvante en la fecundidad masculina, al apuntalar al sistema inmune contra los efectos del resfriado, asma, tabaco y contaminantes aéreos, también suprime la aparición de células leucémicas y el crecimiento del tumor rectal y cáncer de cérvix; en los diabéticos potencia la acción de la insulina y en el metabolismo de los carbohidratos y acelera la curación de los heridas, ayuda en la formación de colágenos, puede reducir edemas, por su efecto de
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estimulación de la diuresis, es un potente neutralizador de venenos (mercurio, arsénico y toxinas bacterianos) y retarda el envejecimiento de la piel (Duran, M.H. 2000).
3.7. Distribución de vitamina c en los alimentos
La vitamina C o ácido ascórbico se encuentran en las frutas cítricas en mayor porcentaje y vegetales como las hortalizas y legumbres (Duran, M.H. 2000).
3.8. Importancia de vitamina c en la dieta
La importancia de la vitamina C o ácido ascórbico es tal que la mayoría de los mamíferos son capaces de sintetizarla, pero algunas especies, entre ellas el hombre, dependen de fuentes exógenas para obtenerla (Duran, M.H. 2000). El humano adquiere, de forma natural, vitamina C de los alimentos, el organismo no lo almacena, por tanto la biodisponibilidad seríca del ácido ascórbico este ceñida por la interacción entre absorción intestinal y excreción renal.
Las propiedades del ácido ascórbico son variados y complejos referidos la mayoría de ellas al papel como antioxidante de las especies de oxígeno reactivos que se generan durante la respiración mitocondrial, que afecta irremediablemente al sistema inmunitario, circulatorio y respiratorio, visión, metabolismo, piel y a todos los células del organismo. De la complejidad funcional de la Vitamina C deriva la necesidad de mantener al día lo que se conoce de este nutriente.
El hombre que no consuma vitamina C, pues el cuerpo no la puede producir, sufre irremediablemente de escorbuto, patología caracterizada por fragilidad de los vasos sanguíneos, daño del tejido conectivo, fatiga y finalmente muerte. Por otro lado, la toxicidad del ácido ascórbico no es común porque el organismo no lo almacena, sin embargo no es prudente consumir suplementos liposolubles en cantidades superiores a 2000mg/día debido a que puede provocar malestar estomacal, diarrea, ataques de gota, empeorar la litiasis renal por cálculo de oxalato, generar daños genéticos (efecto oxidante en el ácido desoxirribonucleico ADN), e incluso provocar deterioro al corazón y otro órganos, debido a que el ácido ascórbico de los suplementos moviliza el hierro almacenado en el organismo (férrico) y lo convierte en la forma dañina (ferroso), que daña los órganos (Duran, M.H. 2000).
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IV. MATERIALES Y MÉTODOS:
4.1. MATERIALES
a) Materia prima: Naranja (zumo)
b) Materiales:
Probeta
Cuchillo
Vaso precipitado de 100ml. y otro de 250ml.
Embudo de cuello delgado
Matraz 150ml.
Papel filtro.
Fiolas
pipetas
c) Reactivos:
Ácido oxálico0.4 %
Ácido ascórbico al 0.1%
2-6 diclorofenolindofenol (solución coloreada)
d) Equipos:
Espectrofotómetro UV- visible
Centrifuga
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4.2. METODOS
4.2.1. Preparación de la curva estándar de vitamina C
a) Preparar los estándares de trabajo (E.T.): tomar alícuotas de 0.1, 0.3, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5 y 4 ml de ácido ascórbico al 0.1% y llevar a volúmenes de 50 ml con una solución de ácido oxálico al 0.4 %. Estas soluciones enumeradas contendrán 5 mg de ácido ascórbico por 100 ml respectivamente.
0.2
0.6
1
2
3
4
6
7
8
Se seleccionó 20 tubos de ensayos y en cada uno de ellos se agregó 1ml de del contenido de cada fiola y también se agregó acido oxálico en cada tubo como agua destilada.
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Luego de seleccionar los 20 tubos de ensayo se procedió preparar la solución para leer la vitamina C.
Del mismo modo se realizó para los 20 tubos de ensayo con sus respectivas concentraciones donde luego fueron leídos en el espectrofotómetro.
Tubo de ensayo Nº 1 de concentración de 0.2
L2
Agregamos 1 ml de la solución de la fiola.
9 ml de Solución coloreada
Realizamos una solución blanca para el análisis.
Agregamos 10 ml de agua destilada.
Tubo de ensayo de concentración de 0.2
9 ml de solución coloreada
L1
Agregamos 1 ml de ácido oxálico
9 ml de agua destilada
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b) Paralelamente, preparamos 4 tubos prueba enumerados del I al IV y agregamos los siguiente:
I. 10 ml de agua destilada
II. 1 ml de acido oxálico al 0.4 % + 9 ml de solución coloreada.
III. 1 ml de E.T Nº 1 + 9 ml de agua destilada
IV. 1 ml de E.T Nº 1 + 9 ml de solución coloreada.
Agregamos 9 ml de agua destilada
Agregamos ácido oxálico.
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V. RESULTADOS
Realización de la curva de calibración
5.1. RESULTADOS
a) Preparación dela curva estándar.
Estándar Trab.
Concentración [ ]
L1
L2
L1-L2 E1 0,2 0.4023 0.4016 0.0007
E2
0.6
0.421
0.389
0.032 E3 1 0.4021 0.3589 0.0432
E4
2
0.3965
0.3324
0.0641 E5 3 0.403 0.2819 0.1211
E6
4
0.3877
0.214
0.1737 E7 5 0.4186 0.2059 0.2127
E8
6
0.427
0.1788
0.2482 E9 7 0.4236 0.1602 0.2634
E10
8
0.4224
0.0863
0.3361
Cuadro1. Lecturas de absorbancia a un de 520 nm
Definir los puntos de la curva (concentraciones a leer)
Medir las alicuotas
Añadir los reactivos
Realizar las lecturas
Efectuar el analisis estadistico
Aceptar o rechazar la curva
Generar la tabla de Abs vs [ ]
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b) Determinación de de la curva estándar de la vitamina C. por el método colorimétrico de la 2,6 diclorofenolindofenol.
Para determinar la curva estándar de la vitamina C se llevó a cabo el método de espectrofotómetro (UV-Visible Spectrophotometers).
Grupo 1 (Lab. Ing. Jhon)
Para una mejor observacion de la linealidad se obviaron los datos de la caida de la curva quedando:
y = 0,0411x - 0,0016 R² = 0,9898
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0,4
0
2
4
6
8
10
L1-L2
concentraciòn [ ]
Curva Patron
Lineal (Curva Patron) [ ] L2 L1 L2 – L1 1
0,4021 0,3589
0,0432 2 0,3965 0,3324 0,0641 3
0,403 0,2819
0,1211 4 0,3877 0,214 0,1737 5
0,4186 0,2059
0,2127 6 0,427 0,1788 0,2482
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Observamos que existe aún una no linealidad en las primeras concentraciones por tanto obviamos esos datos para obtener un mejor rango de linealidad quedando:
y = 0,0435x - 0,0085 R² = 0,9888
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0
2
4
6
8
L1 - L2
Concentraciones [ ]
Series1
Lineal (Series1)
y = 0,046x - 0,02 R² = 0,989
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0
2
4
6
8
L1 - L2
Concentraciones [ ]
Series1
Lineal (Series1) [ ] L2 L1 L2 – L1 2
0,3965 0,3324
0,0641 3 0,403 0,2819 0,1211 4
0,3877 0,214
0,1737 5 0,4186 0,2059 0,2127 6
0,427 0,1788
0,2482
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Datos de grupo 2 en el IITA
L1
L2
L1-L2 0,2921 0,299 0,2 -0,0069
0,3063
0,2644
0,6
0,0419 0,3074 0,2272 1 0,0802
0,3054
0,1883
2
0,1171 0,3018 0,1454 3 0,1564
0,3097
0,1402
4
0,1695 0,297 0,0571 5 0,2399
0,2443
0,0873
6
0,157 0,2176 0,1346 7 0,083
0,2274
0,013
8
0,2144
Para una mejor observacion de la linealidad se obviaron los datos de la caida de la curva quedando:
y = 0,019x + 0,0552 R² = 0,4694
-0,05
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0
2
4
6
8
10
L1 -- L2
Concentraciones [ ]
L1-L2
Lineal (L1-L2)
Lineal (L1-L2)
L1
L2
[ ]
L1-L2 0,2921 0,299 0,2 -0,0069
0,3063
0,2644
0,6
0,0419 0,3074 0,2272 1 0,0802
0,3054
0,1883
2
0,1171 0,3018 0,1454 3 0,1564
0,3097
0,1402
4
0,1695 0,297 0,0571 5 0,2399
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Observamos que existe aún una no linealidad en las primeras concentraciones por tanto obviamos esos datos para obtener un mejor rango de linealidad quedando:
y = 0,0448x + 0,013 R² = 0,9484
-0,05
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0
1
2
3
4
5
6
L1 - L2
Concentraciones
Series1
Lineal (Series1)
Lineal (Series1)
y = 0,0372x + 0,0411 R² = 0,9584
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0
2
4
6
L1 - L2
Concentraciones
Series1
Lineal (Series1)
Lineal (Series1)
L1
L2
[ ]
L1-L2 0,3074 0,2272 1 0,0802
0,3054
0,1883
2
0,1171 0,3018 0,1454 3 0,1564
0,3097
0,1402
4
0,1695 0,297 0,0571 5 0,2399
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VI. CONCLUSIONES
Para la Control de la linealidad fotométrica El estudio de la linealidad fotométrica permite establecer el rango de absorbancia en el que el instrumento tiene respuesta proporcional a los cambios de concentración. Para ello se determina la respuesta del espectrofotómetro a diferentes concentraciones de una sustancia que cumpla con la ley de Lambert-Beer.
Por comparación con una solución conocida: si tenemos 2 soluciones, una problema (P) y una estándar (S), podemos establecer la siguiente relación matemática entre ellas: A través de una curva de calibración: la curva de calibración es la representación gráfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente a la Concentración (eje de abscisas). Se ensayan varias soluciones de concentración conocida y se determinan sus A, construyéndose la curva de calibrado, que es una recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su concentración se averigua por interpolación de las A de las soluciones problema en la curva de calibración.
Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de concentraciones del cromógeno entre las cuales existe una relación lineal entre Absorbancia y Concentración. Cuando la concentración del cromógeno sobrepasa los límites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer, convirtiéndose la recta en una curva. La lectura de la Absorbancia fuera de los límites de linealidad se traduce en una concentración falsamente baja de cromógeno. En esta situación, hay que diluir la muestra para que su concentración entre en los límites de la linealidad.
De la graficas obtenidas; para el grupo 1 su rango de linealidad para el método es entre las concentraciones de 2-6 (Datos obtenidos en el Lab. Ing. Jhon), para el grupo 2 su rango de linealidad para el método es entre las concentraciones de 1-5 (Datos obtenidos en el IITA). Esta diferencia de datos se debió a la mala manipulación por parte del grupo II.
Por otro lado, se sabe que las enzimas de numerosas plantas transforman la glucosa en vitamina C. Los cítricos son los frutos que concentran una mayor cantidad de esta sustancia. La naranja contiene 60 mg por cada 100 mL.
Frente a esto y según los resultados obtenidos, las muestras de naranja, no llegan a ser semejantes a la bibliografía encontrada, la razón es que las muestras tomada de 1 mililitro no fue trascendente y se extrajeron de frutos verdes, es decir no maduras,
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(poco contenido) y a pesar que el ácido oxálico tratara de resaltar el contenido de vitamina C, no fue suficiente. También se puede afirmar que la manipulación de las muestras no fue la más adecuada, sobretodo en el momento del filtrado.
Tras llevado el procedimiento se analiza que así las muestras no fueran las más aptas para el procedimiento, si presentan contenido de vitamina C y se demuestra que es posible determinar dicho contenido, espectrofotométricamente y no con métodos volumétricos convencionales como la valoración con disolución de Yodo, o como el azul de metileno.
Por último, la naranja es fuente natural de vitamina C, depende de la especie, área geográfica en las que son cultivados, las condiciones de almacenamiento una vez recogidos y del estado de maduración.
Como futuros ingenieros agroindustriales para obtener una buena calidad nutritiva de un producto debemos evitar la degradación de la vitamina C; que es muy importante para nuestro organismo.
Se complementó satisfactoriamente nuestros conocimientos en clase con la práctica ejecutada; y pudimos ver la linealidad de los equipos y los contenidos de vitamina C en diferentes concentraciones.
VII. DISCUSIONES
La linealidad es una propiedad importante de los métodos utilizados para efectuar mediciones en un intervalo de concentraciones. La linealidad de la respuesta a patrones puros (MRC) y a muestras realistas puede determinarse. La linealidad generalmente no es cuantificada pero es comprobada mediante inspección o utilizando pruebas de significancia de la no-linealidad. La no-linealidad significativa es usualmente corregida mediante el uso de funciones de calibración no-lineal o eliminada seleccionando un intervalo de operación más restringido. Cualquier desviación residual de la linealidad normalmente es contabilizada por el estimado de la precisión global cubriendo varias concentraciones, o dentro de cualquier incertidumbre asociada a la calibración. (QUAM: 2000.P1. (2000). EURACHEM/CITAC Guide. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Second edition.)
19. COMPOSICIÓN BIOQUÍMICA DE
PRODUCTOS AGROINDUSTRIALES
MUÑOZ ROJAS, Andrea Gisela. VEGA VIERA, Jhonas Abner. Página 19
La vitamina C se encuentra de dos formas, como ácido ascórbico y ácido dehidroascorbico, se utiliza el método de la transformación del ácido ascórbico, este método se utiliza colorante 2,6 dicloroindofenol, y es este la que muestra un máximo de absorción a 540nm. La técnica de análisis, espectrofotometría, es un método muy aceptable, y nos permite determinar con un buen grado de exactitud las absorbancias en las muestras preparadas, así trabajar con curva de calibración para calcular concentraciones de la naranja y otros.
La curva obtenida por el grupo 2, se debió a distintos factores, tales como, una mala manipulación al momento de realizar las diluciones ya que no se tuvo el cuidado de no mezclar las concentraciones al usar una misma pipeta para todas sin un previo lavado al pasar de una concentración a otra provocando de alguna u otra manera una alteración.
Otro de los factores fue al momento de la adición del colorante ya que debe ser inmediato (max. después de 15 seg.) ya que el 2,6 – dicloroindofenol es rápidamente oxidado en la presencia del ácido ascórbico.
Otro error cometido seria al no mantener al blanco (tubo de ensayo con agua destilada) constante, se cambió para cada concentración lo que pudo causar alteración.
VIII. BIBLIOGRAFIA
QUAM: 2000.P1. (2000). EURACHEM/CITAC Guide. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Second edition.
http://fisica.udea.edu.co/~labgicm/Laboratorio%20Fisica%202_2011/2011_Practica%20no%20linealidad.pdf
http://inta.gob.ar/documentos/guia-para-la-verificacion-de-espectofotometros-uv- visible-utilizados-en-el-analisis-de-suelo-y agua/at_multi_download/file/Guia_espectrofot%C3%B3metros_UV.pdf
http://es.slideshare.net/jestval/actividad-experimental-no-11
http://www.lacomet.go.cr/documentosweb/quimica/2011/Publicaciones/sandra.pdf.