Práctica de Micología general Universidad Nacional Pedro Ruíz Gallo

1. UNIVERSIDAD
NACIONAL
“PEDRO RUIZ GALLO”
FACULTAD DE CIENCIAS
BIOLÓGICAS
GUÍA DE PRÁCTICAS
Micología General
BIOLOGIA GENERAL
Docente:
LLONTOP BARANDIARAN GIANINA
Alumnos:
GALINDO CÉSPEDES ANDRES

2. Micología General
GIRÓN SANTA CRUZ YESENIA RUBÍ 2
SANCHEZ VALDERA ESGARD
INTRODUCCIÓN
El mundo de los hongos ha estado en contacto con el hombre desde su origen
mismo, a través de los años éstos han tenido múltiples usos y fines, quizás en un
inicio fueron utilizados como ornato y en el afán del hombre por encontrar nuevas
fuentes nutricionales, como alimento.
Hasta el siglo XVIII, los únicos hongos conocidos fueron los macromicetos o setas,
pero gracias a la creación del microscopio por Leeuwenhoek, se nos ha permitido
asomarnos al mundo no perceptible por el ojo humano, y por ende hemos
encontrado el vasto grupo de los hongos microscópicos, con lo que el hombre ha
obtenido múltiples beneficios, como el desarrollo de variados antibióticos, pero
también ha descubierto los microorganismos patógenos para él, animales, plantas
e insectos.
Los hongos son un grupo diverso de organismos unicelulares o pluricelulares que
se alimentan mediante la absorción directa de nutrientes. Los alimentos se
disuelven mediante enzimas que secretan los hongos; después se absorben a
través de la fina pared de la célula y se distribuyen por difusión simple en el
protoplasma. Junto con las bacterias, los hongos son los causantes de la
putrefacción y descomposición de toda la materia orgánica. Hay hongos en
cualquier parte que existan otras formas de vida.
Guía De Prácticas

3. Micología General
A manera de una visión general y simple, queremos hacer mención de los grupos 3
de hongos de mayor interés como son: ornamentales, nutricionales, tóxicos,
alucinógenos, medicinales, contaminantes y patógenos.
PRÁCTICA N° 01
RECONOCIMENTO Y MANEJO DEL
MATERIAL DE LABORATORIO DE
MICOLOGÍA
En el laboratorio y en las prácticas es esencial la utilización de instrumentos
para el manejo de los químicos y demás aparatos contenidos en él. Es por eso
necesario el reconocimiento de estos, cual y como es su uso, por eso muy
importante reconocerlos, todos realizan una acción específica de acuerdo a la
situación en que nos encontremos. El trabajo en un laboratorio involucra el uso de
equipamientos, ya que, debe contener los suministros y equipos necesarios para
la realización de las diferentes pruebas micológicas y otros elementos cuyos
riesgos es necesario conocer y que será necesario prevenir en todos los casos.
También debe ser un lugar muy limpio y estéril para impedir la contaminación de
las muestras y del personal que labora allí.
En un laboratorio de micología es el primer lugar de trabajo de un microbiólogo
que en el campo se puede encontrar y es aquí en donde se produce la mayoría de
pruebas de laboratorios en cultivos y también se realiza la mayoría de
investigaciones.
OBJETIVO:
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4. Micología General
 Reconocer el material y equipos que conforman un Laboratorio de
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micología, así como su uso y acondicionamiento.
FUNDAMENTO TEÓRICO:
MATERIAL DE LABORATORIO
I.- MATERIAL DE VIDRIO
El vidrio es uno de los materiales más antiguos y más utilizados. Para su uso en el
laboratorio es común que estos materiales sean refractarios (resistentes al calor),
para evitar accidentes cuando sea necesario exponer alguno de estos a llamas u
hornos.
Todos los vidrios no son perfectos para todas las técnicas, a veces se necesitan
vidrios con resistencia técnica, con resistencia mecánica. Según el uso que le
queramos dar aparecen vidrios especiales. La mayoría de los utilizados son vidrios
borosilicatados, los cuales ofrecen gran resistencia térmica (vidrio pirex, quimax).
Cuando se emplea el material de vidrio hay que tomar unas precauciones: No los
podemos someter a cambios bruscos de temperatura (se provocan tensiones que
pueden romper el cristal).
• PLACAS DE PETRI
Es un recipiente de cristal o de plástico, que consta
de una base circular, y las paredes son de una altura
baja aproximadamente de (1 cm); y una cubierta de
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5. Micología General
la misma forma pero algo más grande de diámetro para que encaje como una
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tapa. Los hay de diferentes diámetros, los más utilizados en el laboratorio son los
de 10 cm de diámetro. Se utiliza en los laboratorios principalmente para el cultivo
de bacterias y otros microorganismos, soliéndose cubrir el fondo con distintos
medios de cultivo (por ejemplo agar) según el microorganismo que se quiera
cultivar.
Permiten el aislamiento del hongo.
• LAMINAS PORTAOBJETOS
Los portaobjetos: son láminas de vidrio rectangulares,
donde se coloca la muestra para poder verla al
microscopio, existen portaobjetos con cavidades
semiesféricas que pueden ser de distinto diámetro y
profundidad, se utilizan para técnicas de laboratorio en
lasque se hacen observaciones en vivo.
Estás son láminas de vidrio transparente de forma rectangular y pequeño grosor.
• LAMINAS CUBREOBJETOS
Cubreobjetos: Son laminas muy finas de vidrio, con
las que se cubren las muestras que quiero ver al
microscopio. Pueden ser de distintos tamaños.
Los cubreobjetos son finas laminillas de menor
tamaño que la lámina portaobjetos, de forma
rectangular o cuadrada. Ambos son importantes en la observación microscópica
de los microorganismos en este caso de para la observación de hongos.
• TUBOS DE ENSAYO DE 15 X 150
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6. Micología General
Son tubos de vidrio neutro, de paredes gruesas, resistentes a altas temperaturas.
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Son de diferentes tamaños y capacidad. Para utilizarlos, estos deben estar
taponados con algodón no absorbente y esterilizado.
• MATRACES
El matraz o frasco de Erlenmeyer es un
Recipiente de cristal donde se mezclan
las soluciones químicas es de forma
cónica con una abertura en el extremo
angosto, generalmente prolongado con
un cuello cilíndrico, que suele incluir
algunas marcas.
Por su forma es útil para realizar mezclas por agitación y para la evaporación
controlada de líquidos; además, su abertura estrecha permite la utilización
detapones.
• PIPETAS
La pipeta es un instrumento volumétrico de laboratorio que permite medir
alícuota de líquido con bastante precisión. Suelen ser de vidrio. Está formado
por un tubo transparente que termina en una de sus puntas de forma cónica,
y tiene una graduación (una serie de marcas grabadas) indicando distintos
volúmenes.
Son de dos tipos:
 Graduadas: Se caracterizan por
presentar un número fracción,
donde el numerador representa
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7. Micología General
el volumen total de la pipeta y el numerador las veces en que está
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dividida(ml). Las pipetas graduadas pueden ser:
 Terminales: Cuando el vaciado del líquido a medir se realiza
hasta la punta de la pipeta;
 No Terminales: Cuando el vaciado del líquido se realiza hasta la
última línea de graduación.
 No Graduadas: Llamadas también pipetas Pasteur, son fabricadas con
varillas de vidrio de diámetro de 4 mm× 30 ó 40 cm de longitud.
Las pipetas para ser utilizadas, deben ser taponadas con algodón no
absorbente en la zona de la boquilla y luego envueltas en papel para
ser esterilizadas.
II.- MATERIAL DE METAL
 ANSAS MICOLÓGICAS
Constituidas por un vástago de metal con
cubierta de ebonita aislante del calor y en el
extremo proximal, una tuerca para insertar el
alambre de platino o nicrom. Que puede
terminar en anillo (asa de kolle), en punta o
aguja y en ángulo recto (asa micológica).
Se emplea para transportar o arrastrar o
trasvasar inóculos (pequeño volumen que
contiene microorganismos en suspensión) desde la solución de trabajo
también llamada “solución madre” al medio de cultivo (sólido o líquido) o de
un medio a otro (resiembra). También sirve para la realización de frotis.
 GRADILLAS DE METAL
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8. Micología General
Sirven para colocar los tubos durante la sesión de trabajo y también para
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llevar los tubos a la estufa o incubadora.
 MECHERO BUNSEN
Un mechero o quemador Bunsen es un instrumento utilizado
en laboratorios científicos para calentar
o esterilizar muestras o reactivos químicos.
Es un quemador de gas del tipo de premezcla y la llama es
el producto de la combustión de una mezcla de aire y gas.
El mechero Bunsen es una de las fuentes de calor más
sencillas del laboratorio y es utilizado para obtener
temperaturas no muy elevadas. Consta de una entrada de
gas sin regulador, una entrada de aire y un tubo de
combustión.
EQUIPOS DE LABORATORIO
þ AUTOCLAVE
Un autoclave de laboratorio es un dispositivo destinado para la esterilización de
material contaminado; de los
medios de cultivo y otros.
El fundamento del autoclave es que
coagula las proteínas de los
microorganismos debido a la
presión y temperatura, aunque
recientemente se ha llegado a
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9. Micología General
saber de algunas formas acelulares, tal como los priones, que pueden soportar
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las temperaturas de autoclave.
Consta de una caldera de cobre batido estaño interiormente, protegido por una
camisa metálica también de cobre, formando paredes dobles. En su base está
instalada la fuente calorífica, constituida por una resistencia que va conectada a
un termostato. A una distancia del fondo del recipiente, está la placa cribosa
para apoyo del material y para la salida del vapor; en la parte superior se halla
la tapa, que es pesada (de bronce fundido) en cuyo borde interno está
adaptado un arandel de caucho para el cierre hermético del equipo. Los tornillos
o bulones en el margen superior refuerzan el cierre, evitándose el escape del
vapor. Posee además un manómetro (que marca las libras de presión interno
del equipo); una válvula de seguridad, (para escape del vapor cuando la presión
excede a la contención del aparato), un termómetro y una llave o espita para la
salida del aire y vapor cuando empieza a hervir el agua.
El vapor de agua se aplica en una cámara cerrada en la que existe un
generador de vapor; cuando este se produce, desplaza al aire, que sale por una
válvula o espita que se cierra en el momento en ya sale vapor durante 15
minutos. Posteriormente se consigue la presión deseada teniendo en cuenta
que el vapor a 1 a.m de presión corresponde a 121º C de temperatura, que
aplicada durante 15 ó 20 minutos. Destruye todas las formas vegetativas y
esporuladas de los microorganismos.
þ HORNO
Es un aparato muy utilizado en la
esterilización por calor seco. Tiene
variadas formas, pero básicamente
está constituido por una resistencia
y un termostato que regula altas
temperaturas. Emplea aire caliente,
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10. Micología General
el calentamiento es por electricidad, la temperatura puede llegar a 180°C, que
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se mantiene por un termostato.
þ ESTUFA O INCUBADORA
Son utilizadas para la incubación de los
microorganismos facilitando su desarrollo.
Tiene la misma estructura de un horno
pero la temperatura está calibrada en 35 –
37ºC.
þ MICROSCOPIO
Es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños
para ser vistos a simple vista, es decir, permiten aumentar el tamaño de los
microorganismos cientos o miles de veces.
El tipo más común y el primero que se inventó
es el microscopio óptico. Se trata de un
instrumento óptico que contiene una o varias
lentes que permiten obtener una imagen
aumentada del objeto y que funciona por
refracción.
Un laboratorio sin microscopio, o con un
microscopio que no se conserva de manera
adecuada, no se puede considerar equipado
con propiedad.
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11. Micología General
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OTROS MATERIALES
• CAJAS DE PLASTICO.
Permite el aislamiento de hongos y comprobar la
esterilidad de la semilla.
Asi como tambien permite comprobar la patogenicidad de
los hongos.
• PAPEL FILTRO
Permite conservar la humedad en el aislamiento de hongos y la esterilidad de la
semilla.
El papel de filtro puede encontrarse de distintas
formas, tamaños así como materiales. Por ello,
se puede diferenciar a través de:
El material, estando formado por celulosa,
derivados de ésta u otros.
El tamaño, teniendo una forma normalmente redondeada (ya que se introduce
dentro de un embudo) pero pudiendo encontrarse con distintos diámetros.
La textura, puesto que en función de la utilidad que se le quiera dar al papel de
filtro se puede necesitar un papel de filtro con una textura más o menos rugosa.
• VASOS DE PRECIPITACION
Permite desinfectar las muestras.
Es un recipiente cilíndrico de vidrio fino que se utiliza
muy comúnmente en el laboratorio, sobre todo, para
preparar o calentar sustancias y traspasar líquidos.
Son cilíndricos con un fondo plano; se les encuentra de
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12. Micología General
varias capacidades, desde 1 ml hasta de varios litros. Normalmente son de vidrio o
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de goma aquéllos cuyo objetivo es contener gases o líquidos.
• BAGETAS
Sirve para poder agitar o poder mezclar
algunas soluciones a utilizar.
• FRASCOS DE VIDRIO DE SUPERFICIE PLANA
se utiliza en el laboratorio de biología,
especiefiacementee n este caso
micologia para comprobar hongos.
CONCLUSIONES
• Conocimos al importancia y uso de los materiales de laboratorio utilzados
en el laboratorio de Micologia General.
• Reconocimos el material y el equipo de Laboratorio de Micología.
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13. Micología General
• Aprendimos su uso y funcionamiento para el desarrollo de la práctica.
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PRÁCTICA N° 02
MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo son sustratos que semejan el nicho ecológico de los hongos
con la finalidad de:
 Permite el aislamiento de los hongos
 Permite la utilización de los hongos mediante la formación de colonias.
 Permite estudiar las características macroscópicas y microscópicas de un
hongo.
 Permite obtener un cultivo puro (cepa)
 Los medios de cultivo deben brindarle a los hongos lo necesario para su
crecimiento y desarrollo; para ello debe de contar con los siguientes
requisitos:
1) Una fuente de carbono dada por la glucosa
2) Una fuente de nitrógeno dada por la neopeptona.
3) Un soporte solido otorgado por el agar o la gelosa.
4) Y un pH ligeramente acido rango entre pH5-6
5) Temperatura ambiente entre 20ºc-28ºc
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.
Los medios de cultivo son mezclas de sustancias que van a permitir el optimo
crecimiento y desarrollo de los hongos.
Es un sustrato o solución de nutrientes, en los que crecen y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar las diferentes especies
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14. Micología General
en este caso de hongos, para luego proceder a su identificación y llevar a cabo
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una serie de estudios complementarios.
OBJETIVO:
 Reconocimiento de los principales medios de cultivo y reactivo utilizados en
micología.
FUNDAMENTO TEÓRICO:
Todos los medios de cultivo utilizados en micología contienen los nutrientes
suficientes para asegurar el desarrollo de los hongos (carbono, nitrógeno,
vitaminas, oligoelementos, etc.). El pH ha de ser ligeramente ácido para facilitar el
crecimiento de los hongos e inhibir al mismo tiempo el desarrollo de otros
microorganismos.
También se añaden antibióticos antibacterianos para inhibir el crecimiento de las
bacterias saprofitas que suelen contaminar las muestras. Los más usados son el
Cloranfenicol y la Gentamicina. Se añade también actidiona (Cicloheximida) que
inhibe el desarrollo de hongos saprofitos ambientales (aunque tiene el
inconveniente de que inhibe también el crecimiento de Cryptococcus neoformans).
Los medios en placa tienen la ventaja de ofrecer una gran superficie para el
aislamiento pero para que los hongos puedan soportar la deshidratación durante el
largo período de incubación a que van a ser sometidos (un mes o más), tienen que
tener una gruesa capa de medio (25 a 40 ml). Los medios en placa tienen la
desventaja de que son más peligrosos a la hora de su manipulación y fáciles de
contaminar.
Los medios en tubo tienen una superficie de trabajo mucho más pequeña, pero
ofrecen máxima seguridad en su manipulación y buena resistencia a la
deshidratación y contaminación.
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15. Micología General
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MATERIALES Y MÉTODOS: formulas de los medios de cultivo
I.- MEDIOS DE CULTIVO
þ AGAR SABOURAUD GLUCOSADO
El agar sabouraud glucosado o también llamado agar Dextrosa Sabouraud es un
medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras.
El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificación a la
fórmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por
Raymand Sabouraud. Este medio es utilizado para el
cultivo de hongos patógenos, particularmente de aquellos
asociados con infecciones de piel. La alta concentración
de dextrosa y la acidez del pH hacen a éste un medio
selectivo para hongos. Con la adición de cicloheximida,
estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento
primario de dermatofitos.
Este medio es también utilizado para la determinación microbiológica en
cosméticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. En este medio las
peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los
microorganismos, la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado
como agente solidificante.
Componentes
 Dextrosa : 2.0 g
 Neopeptona : 1.0 g
 Agar : 1.5 g
 Agua destilada : 100 ml
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16. Micología General
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Procedimiento
Se mezclan todos los componentes y se somete al calor. Luego equilibramos
el pH y acondicionamos el matraz para llevar el medio a esterilizar.
þ AGAR PAPA DEXTROSA
El Agar Dextrosa y Papa es un medio utilizado para el cultivo de hongos y
levaduras a partir de muestras de alimentos, derivados de leche y productos
cosméticos.
El Agar Dextrosa y Papa puede ser suplementado
con antibióticos o ácidos para inhibir el crecimiento
bacteriano. Este medio es recomendado para
realizar el recuento colonial. También puede ser
utilizado para promover el crecimiento de hongos y
levaduras de importancia clínica. La base del medio
es altamente nutritiva y permite la esporulación y la
producción de pigmentos en algunos dermatofitos. Algunos procedimientos
señalan bajar el pH del medio a 3.5 ± 0.1 con ácido tartárico al 10 %, para
inhibir el crecimiento bacteriano.
La infusión de papa promueve un crecimiento abundante de los hongos y
levaduras y el agar es adicionado como agente solidificante.
Componentes
 Papa : 20.0 g
 Glucosa : 2.0 g
 Agar : 1.5 g
 Agua destilada : 100 ml
Procedimiento
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17. Micología General
Primero se procede a lavar, pelar y cortar la papa en cuadraditos medianos.
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Pesar la papa y luego llevarla a hervir en los 100 ml durante 20 min. Luego
colar con una gaza la papa y restituir el solvente. Después en el solvente
agregar los demás componentes luego llevar al calor para disolver el agar; se
equilibra el pH, se acondiciona el matraz para llevar a esterilizar.
II.- REACTIVOS
1.-Liquidos De Montaje.
þ ACLARANTES (Hongos oscuros)
 Hidróxido de Potasio al 10%
 Lactofenol
þ COLORANTE AZUL DE ALGODÓN (Hongos claros)
 Azul de algodón 1% (solución acuosa)
 FORMuLAs:
Azul de algodón.
 Azul de algodón:1g
 Agua:100ml
Lactofenol (azul de amamm)
 Fenol: 20 ml
 Ácido láctico: 20 ml
 Glicerina: 40 ml
 Agua destilada: 20 ml
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18. Micología General
2.-Liquidos De Conservación.
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 Azul de amman :
lactofenol + azul de algodon
CONCLUSIONES
• Reconocimos los principales medios de cultivo utilizados en micología.
• Aprendimos el procedimiento para preparar los reactivos utilizados para la
observación y montaje de los hongos.
• Aprendimos las formulas utilizadas en los diferentes reactivos como
Lactofenol (azul de amamm), Azul de algodón.
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19. Micología General
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PRACTICA Nº 03
MONTAJES MICROSCOPICOS
Se conoce que en general, todos los hongos son organismos eucariotas
heterótrofos, necesitan de compuestos orgánicos que contengan carbono como
fuente de energía y nitrógeno; son aerobios o anaerobios facultativos y, la mayoría
de ellos viven como saprofitos en el suelo y agua.
También producen esporas, no tienen clorofila, con nutrición por absorción,
generalmente con reproducción sexual y asexual; el cuerpo consiste generalmente
de filamentos ramificados con pared celular quitinosa.
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20. Micología General
Constituyen uno de los grupos de organismos más importantes para la vida del
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hombre, ya que son los responsables de gran parte de la descomposición de la
materia orgánica aumentando su disponibilidad en el suelo; pueden ser
comestibles, venenosos o psicotrópicos; muchos son patógenos; otros, producen
ciertas sustancias beneficiosas o intervienen en procesos de elaboración de
algunos comestibles.
Uno de las más sencillas para poder identificar hongos es por medio del
examen directo. El examen directo es una técnica muy importante por la cual se
puede distinguir las diferentes estructuras de los hongos para su identificación. Y
se debe tener destreza y habilidad para realizar un montaje de calidad y tener una
buena observación de las características de los hongos.
Las muestras para un examen micológico deben ser representativas, abundantes,
libres de sustancias que inhiban o alteren la viabilidad de los hongos.
OBJETIVOS:
 Realizar un montaje en fresco utilizando cinta adhesiva.
 Familiarizarse con las estructuras microscópicas de los hongos
FUNDAMENTO TEÓRICO:
MATERIALES
• Liquidos de montaje
• Láminas portaobjetos
• Laminillas cubreobjetos
• Cinta adhesiva
• KOH o lactofenol para hongos oscuros
• Anza micológica
• Microscopios
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21. Micología General
• Alimentos enmohecidos
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PROCEDIMIENTO
1. colocar una gota de líquido de montaje en el centro de la lamina porta.
2. Con el ansa micologica obtener una pequeña muestra de micelio; trasladar
el preparado a la gota de líquido de montaje.
3. Cubrir con laminilla y observar.
Se toma la muestra de un alimento
(naranja) enmohecido. Se agrega el lactofenol al porta,
después la muestra obtenida y se
lleva a observar al microscopio
RESULTADOS
Al observar la muestra por el microscopio se pudo identificar al hongo rhisopus,
mucor y alternaria
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22. Micología General
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CONCLUSIONES
 Se logro aprender y dominar la técnica de examen directo de los hongos a
partir de las muestras utilizadas como es el caso d ela naranja.
 Se reconoció y diferenciar las diferentes estructuras microscópicas propias
de los hongos en este caso de rhisopus, mucor y alternaria.
Guía De Prácticas

23. Micología General
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Guía De Prácticas